本文關(guān)鍵詞：IVM小鼠腦組織神經(jīng)活動(dòng)配-體受體互作用通路基因表達(dá)改變可導(dǎo)致父源性子二代基因表達(dá)異常

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【摘要】：目的：研究IVM小鼠F2代腦組織神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用(neuroactive ligand-receptor interaction)通路基因Gabra6, Glra1, Gria4, Grid2, Agtr2, Slpr5, Galr1, Grm4在IVM F2代的表達(dá)情況以揭示上述IVM F1代新生期異常表達(dá)基因的傳代效應(yīng),并進(jìn)一步研究F2代中Glra1的甲基化狀況及相應(yīng)的蛋白表達(dá)情況。材料和方法：1.利用近交系C57BL/6J小鼠,通過(guò)單純注射孕馬血清獲取未成熟卵,經(jīng)體外成熟培養(yǎng)、ICSI輔助受精和胚胎移植等方法建立IVM小鼠模型。通過(guò)注射孕馬血清和人絨毛膜促性腺激素獲取成熟卵,經(jīng)ICSI輔助受精和胚胎移植等方法建立VVM小鼠模型作為對(duì)照組,自然妊娠(natural conceived, NC)小鼠為陰性對(duì)照組。三組F1代新生小鼠各取一只處死后獲得腦組織運(yùn)用Mouse Genome 430 2.0芯片進(jìn)行腦組織全基因表達(dá)譜分析,并通過(guò)進(jìn)一步的Pathway分析提示神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路中Gabra6, Glra1, Gria4, Grid2, Agtr2, Slpr5, Galr1, Grm4基因表達(dá)差異最為顯著。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)上述F1代各組小鼠在新生及成年期都進(jìn)行了驗(yàn)證檢測(cè),提示相比VVM組,IVM新生F1代雄雌小鼠中以上基因均出現(xiàn)了不同程度的上調(diào),到成年后除IVM雌性小鼠Agtr2基因表達(dá)仍上調(diào)之外,其余的基因表達(dá)異常均得到糾正(具體數(shù)據(jù)詳見2010年浙江大學(xué)王寧博士畢業(yè)論文)。2.對(duì)上述F1代性成熟期各組雌雄小鼠兩兩1：1自然交配,得到相應(yīng)的F2代。將F2代的類型分為IVM組[包括IVM(?)+NC(?) (MN), IVM(?)+IVM(?)(MM),NC(?)+ IVM(?)(NM)]、VVM組[包括VVM(?)+NC(?)(IN), VVM(?)VVM(?)(Ⅱ), NC(?)+VVM(?)(NI)]、NC組[NC(?)+NC(?)]三大組,包括七個(gè)小組,每小組8只相應(yīng)F2代小鼠。其中以NC F2代小鼠為陰性對(duì)照組。3.出生的F2代小鼠飼養(yǎng)至10周時(shí),進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn),記錄各組小鼠的潛伏期及穿臺(tái)次數(shù)(該部分?jǐn)?shù)據(jù)課題組先前已完成,數(shù)據(jù)暫未發(fā)表,各組間小鼠學(xué)習(xí)、認(rèn)知能力未見明顯差異,具體數(shù)據(jù)詳見2010年浙江大學(xué)王寧博士畢業(yè)論文)后分別處死獲取各組小鼠的腦組織。4.通過(guò)熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)10周各組小鼠腦組織的神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路中相關(guān)基因(Gabra6, Glra1, Gria4, Grid2, Agtr2, Slpr5, Galrl, Grm4)的表達(dá)。5.利用焦磷酸測(cè)序技術(shù)檢測(cè)10周各組小鼠Glra1各位點(diǎn)的甲基化情況。6.通過(guò)western-blot技術(shù),檢測(cè)各組小鼠腦臟組織Glra1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1.IVM對(duì)F2代小鼠腦組織神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路各基因表達(dá)的影響與VVM組相比,IVM F2代小鼠10周時(shí),腦組織中Glra1表達(dá)水平降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中以單一父源性因素影響最為明顯(MN組F2代Glra1表達(dá)量較IN組差異最為明顯)。各組間F2代小鼠腦組織Gria4, Grid2, Agtr2, Slpr5, Galr1, Grm4的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.IVM對(duì)10周F2代小鼠腦組織Glra1甲基化修飾影響(1)比較NC組,IVMF2代小鼠腦組織Glra1的CpG2位點(diǎn)甲基化水平升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與VVM小鼠F2代相比,甲基化水平也有升高,但未達(dá)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IVM小鼠腦組織Glra1的CpG6位點(diǎn)甲基化率相比VVM組及NC組均有顯著性升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而小鼠腦組織Glra1其他CpG位點(diǎn)甲基化狀態(tài)三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)資料同時(shí)顯示,單一性父源性因素對(duì)F2代小鼠腦組織甲基化率影響最為明顯,在本研究進(jìn)一步分析單純IVM父源性小鼠所生子代(MN組)中Glra1的甲基化狀態(tài)相比單純VVM父源性小鼠(IN組)在CpG1、CpG2位點(diǎn)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.IVM對(duì)F2代腦組織Glra1蛋白表達(dá)的影響相比NC組,10周IVMF2代小鼠腦組織Glra1蛋白表達(dá)水平降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但相比VVM組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中從單一父源性因素對(duì)F2代Glra1蛋白表達(dá)的影響分析,通過(guò)對(duì)MN組和N組蛋白表達(dá)進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn),結(jié)果表明單純IVM父源性小鼠所生子代(MN組)中Glra1的蛋白表達(dá)量較單純VVM父源性小鼠(IN組)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：1.IVM新生F1代父源性小鼠腦組織神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路基因異常表達(dá)可導(dǎo)致F2代腦組織中的Glra1基因表達(dá)異常。2.IVM新生F1代腦組織中神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路基因的表達(dá)異常雖然在其成年后大部分可以糾正,但I(xiàn)VMF2代中Glral的表達(dá)仍可出現(xiàn)異常,這可能是由于F1代中異常表觀修飾影響其雄性生殖系造成代間遺傳導(dǎo)致的。3.IVMF2代小鼠雖然在表型上未見明顯的神經(jīng)系統(tǒng)及認(rèn)知能力的發(fā)育差異,但存在潛在的神經(jīng)系統(tǒng)疾病高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。尤其是父源性IVM F1代婚配可能對(duì)F2代的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育存在不良影響。
【關(guān)鍵詞】：未成熟卵體外培養(yǎng)技術(shù) 神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用通路 甲基化修飾 小鼠模型 傳代效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 致謝4-6
• 序言6-9
• 中文摘要9-12
• 英文摘要12-16
• 縮略詞表16-18
• 引言18-21
• 1 材料和方法21-24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-40
• 3 結(jié)果40-46
• 4 討論46-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 綜述55-67
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 作者簡(jiǎn)介67

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本文編號(hào)：529554