本文關(guān)鍵詞：TNNI3K基因過表達(dá)誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化

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【摘要】：目的研究肌鈣蛋白Ⅰ相關(guān)激酶(TNNI3K)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞(m ESC)向心肌細(xì)胞分化的影響。方法從形態(tài)和細(xì)胞免疫熒光、堿性磷酸酶試驗(yàn)以及HE染色鑒定m ESC的多能性。采用懸滴法培養(yǎng)m ESC形成擬胚體(EB),自分化為跳動(dòng)的心肌細(xì)胞,通過細(xì)胞免疫熒光和透射電鏡(TEM)方法鑒定。慢病毒分別攜帶h TNNI3K基因和siRNA感染m ESC,并分別自分化為心肌細(xì)胞,通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、細(xì)胞免疫熒光、Western blot等分析心肌特異性蛋白表達(dá)水平的差異。結(jié)果 m ESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表達(dá)呈陽性(綠色),ALP試驗(yàn)呈藍(lán)紫色,核質(zhì)比1。正常自分化的細(xì)胞免疫熒光顯示cTnⅠ、cTnT、MLC2以及α-actinin陽性(綠色),肌節(jié)清晰可見。TEM顯示心肌細(xì)胞獨(dú)有的肌纖維亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。過表達(dá)組cTnT+陽性細(xì)胞率高于對(duì)照組,Western blot顯示心肌特異性蛋白cTnT、cTnⅠ、MLC2、α-actinin等顯著高于對(duì)照組,且細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示MHC6蛋白提前表達(dá)。干擾組不僅cTnT+陽性細(xì)胞率顯著低于對(duì)照組,而且心肌特異蛋白也顯著低于對(duì)照組,MHC6蛋白表達(dá)延后。結(jié)論TNNI3K基因能增強(qiáng)心肌細(xì)胞的生成,促進(jìn)m ESC向心肌細(xì)胞的分化。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院國(guó)家心血管病中心阜外醫(yī)院心血管疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室血脂異常與心血管病診治中心;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院國(guó)家心血管病中心阜外醫(yī)院心血管疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠胚胎干細(xì)胞 肌鈣蛋白Ⅰ相關(guān)激酶 心肌細(xì)胞
【基金】：教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20101106120007) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81100118)
【分類號(hào)】：R542.22
【正文快照】： 目前,伴隨著社會(huì)人口的老齡化,心肌梗死(myocardial infarction,MI)發(fā)病率逐年增高[1]。MI常規(guī)治療手段,如溶栓治療及冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù),均難以逆轉(zhuǎn)其心臟功能。心臟移植術(shù)也因供體來源、免疫排斥等因素而受限制。細(xì)胞移植是治療MI的新方法,近年來受到關(guān)注[2]。骨髓間充質(zhì)干

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1 趙玲;杜曉蘭;王建民;陳林;;小鼠胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年06期

2 譚廣云;謝萬華;周焱;黃永業(yè);宋紅肖;李棟;宋娜;袁婷;段新平;逄大欣;歐陽紅生;;綠色熒光小鼠胚胎干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年12期

3 阮靜;沈潔;汪錚;崔大祥;;調(diào)控量子點(diǎn)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞活性影響的研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

4 宗卉,劉乃豐,葉銀英,劉紅林,汪河海,范必勤;小鼠胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)與建系[J];南京鐵道醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1997年02期

5 姚丹丹,苑春慧;不同多羥基化合物對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞低溫貯存的影響[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2005年04期

6 徐令;麥友剛;溫麗華;梅志勇;;小鼠胚胎干細(xì)胞體外分化為肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年S1期

7 沈岳飛;羅杰峰;莫雪安;龍桂芳;;小鼠胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

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本文編號(hào)：517850