本文關(guān)鍵詞：Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備與鑒定

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【摘要】：本研究旨在構(gòu)建Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠,并對(duì)Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行RNA水平上的篩選,為研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生機(jī)制提供一種動(dòng)物模型。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)獲得小鼠組織的cDNA,并以其為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行膠回收,然后進(jìn)行擴(kuò)增片段和空載體的雙酶切,將酶切后膠回收得到的Wip1基因全長(zhǎng)與載體pcDNA3.1(+)進(jìn)行連接,獲得Wip1-pcDNA3.1(+)過(guò)表達(dá)載體,最終得到Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因原代小鼠,并利用Southern blotting方法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)小鼠進(jìn)行鑒定篩選。試驗(yàn)獲得Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因原代小鼠30只,利用Southern blotting方法鑒定出陽(yáng)性小鼠11只,陽(yáng)性率為36.67%,實(shí)時(shí)熒光定量PCR篩選Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠陽(yáng)性率為32.84%。以上結(jié)果表明,試驗(yàn)成功構(gòu)建了Wip1-pcDNA3.1(+)過(guò)表達(dá)載體,并且經(jīng)過(guò)Wip1基因在小鼠組織DNA和RNA水平上的鑒定篩選,成功獲得了Wip1過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【關(guān)鍵詞】： Wip 過(guò)表達(dá) 小鼠模型
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31572378)
【分類號(hào)】：R-332;R543.5
【正文快照】： 野生型P53誘導(dǎo)的蛋白磷酸酶1(wild-typep53-induced phosphatase,Wip1)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶,屬于PP2C(serine/threonine spe-cific protein phosphatase type 2c,PP2C)家族,并由PPM1D(protein phosphatase magnesium-depend-ent 1delta,PPM1D)基因編碼[1],在小鼠上,

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