本文關(guān)鍵詞：巴馬小型豬OCA2基因序列、組織表達(dá)分析及載體構(gòu)建研究

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【摘要】：旨在為豬的毛色調(diào)控機(jī)制和模擬與OCA2基因相關(guān)的人類疾病模型的研究建立基礎(chǔ)。本研究將GenBank公布的豬OCA2基因序列(NC_010457.4)所缺失的5個外顯子(20~24號外顯子)進(jìn)行了克隆和劃分,在基因組水平和cDNA水平上采用PCR擴(kuò)增和Sanger測序方法對劃分結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證;并對OCA2基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,同時在廣西巴馬小型豬中對OCA2基因外顯子的多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行了篩選。采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)(Q-PCR)分析了OCA2基因在各組織中的表達(dá)規(guī)律,并以皮膚全長cDNA為模板構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,并利用XhoⅠ和SacⅡ限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證。在已公布的豬OCA2基因中成功劃分和克隆了所缺失的外顯子,并在OCA2基因所有外顯子中共發(fā)現(xiàn)了10個SNPs位點(diǎn),其中7個為同義突變,3個為錯義突變(R124H、G509D、R573H);豬OCA2基因在多種組織中廣泛表達(dá),其中,肺、大腦、小腦相對高表達(dá),脾、胃、盲腸和皮膚中度表達(dá),而在心和肝中表達(dá)量較低;OCA2基因重組表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)酶切和測序鑒定證明構(gòu)建成功。本研究初步探討了豬OCA2基因的序列信息及組織表達(dá)規(guī)律,并構(gòu)建了OCA2基因重組表達(dá)質(zhì)粒,為該基因下一步的功能學(xué)研究及疾病模型的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國科學(xué)院動物研究所干細(xì)胞與生殖生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 豬 OCA基因 熒光定量PCR 重組表達(dá)質(zhì)粒 單核苷酸多態(tài)性
【基金】：973國家科技重大專項(xiàng)(2011CBA01005) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(2012AA020602)
【分類號】：S828
【正文快照】： 白化病(Albinism)是一組與黑色素合成相關(guān)的基因發(fā)生突變,導(dǎo)致眼、皮膚、毛發(fā)或全身黑色素缺乏的一種單基因遺傳性疾病[1]。醫(yī)學(xué)上白化病分為3種類型,其中,眼、皮膚、毛發(fā)均有色素缺乏的稱為眼皮膚白化病(Oculocutaneous albinism,OCA),僅有眼色素減少或缺乏的稱眼白化病(Ocul

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本文編號：513666