本文關(guān)鍵詞：中華蜜蜂信息素結(jié)合蛋白OBP10的基因克隆、原核表達和配基結(jié)合特性分析

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【摘要】：【目的】氣味結(jié)合蛋白在中華蜜蜂Apis cerana cerana嗅覺系統(tǒng)中起到重要作用,本實驗擬研究中華蜜蜂一個新的信息素結(jié)合蛋白OBP10及其與蜜蜂信息素以及蜜源開花植物揮發(fā)物的結(jié)合特性。【方法】本實驗通過RT-PCR擴增獲得OBP10基因全長(Gen Bank登錄號:KP717060.1),以p ET-30a構(gòu)建原核表達載體,并以Ni2+瓊脂糖柱進行重組蛋白表達和分離純化,在N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)作為熒光報告子下利用熒光光譜法體外研究重組Acer OBP10與多種候選化學(xué)配基的結(jié)合特征。【結(jié)果】經(jīng)多序列聯(lián)配分析,發(fā)現(xiàn)Acer OBP10的多個同源基因均為信息素結(jié)合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)。配基結(jié)合特性分析顯示,Acer OBP10對14種候選配基中的蜂王信息素成分對羥基苯甲酸甲酯(HOB)競爭力最大,相對熒光可降至6.06%,解離常數(shù)11.04μmol/L;進一步表明Acer OBP10屬于一個新的中蜂PBPs。此外,Acer OBP10也能和包括工蜂信息素(香葉醇和橙花醇)、報警信息素(2-庚酮和乙酸異戊酯)等蜜蜂信息素以及蜜源開花植物揮發(fā)物之一的β-紫羅蘭酮結(jié)合,表明Acer OBP10可能是一種以信息素結(jié)合為主的多功能結(jié)合蛋白�！窘Y(jié)論】Acer OBP10是中蜂一個新的信息素結(jié)合蛋白,與此前我們鑒定的蜂王信息素結(jié)合蛋白Acer ASP1相比,Acer OBP10對蜜蜂信息素的結(jié)合譜更為廣泛,這些結(jié)果將對進一步研究中華蜜蜂信息素識別和傳遞提供理論基礎(chǔ),對于深入了解中華蜜蜂嗅覺影響生理功能的行為機制具有重要意義。
【作者單位】： 中國計量學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院浙江省生物計量及檢疫檢驗重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 中華蜜蜂 信息素結(jié)合蛋白 信息素 熒光競爭 結(jié)合特性
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31372254) 中國博士后科學(xué)基金(2014M560488,2015T80624) 杭州市科技計劃項目(20140432B12)
【分類號】：Q966
【正文快照】： Molecular cloning,prokaryotic expression and lignand-bindingcharacterization of a novel pheromone binding protein OBP10 in Apiscerana cerana(Hymenoptera:Apidae)靈敏的嗅覺系統(tǒng)在昆蟲覓食、尋偶、交配、種群管理等活動中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。其中氣味結(jié)合蛋白(odo

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