本文關(guān)鍵詞：人源RAD9A基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：構(gòu)建人源細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)蛋白R(shí)AD9A基因真核細(xì)胞表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表達(dá)。通過(guò)PCR法從293T細(xì)胞c DNA中擴(kuò)增RAD9A基因編碼區(qū),經(jīng)雙酶切后連接入表達(dá)載體p EGFP-N1多克隆位點(diǎn),并對(duì)陽(yáng)性重組子進(jìn)行鑒定。將p EGFPRAD9A轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞786-0中,熒光顯微鏡觀察GFP-RAD9A融合蛋白的表達(dá)及亞細(xì)胞定位,Western blot免疫印記法檢測(cè)轉(zhuǎn)染p EGFP-RAD9A后的腎癌細(xì)胞786-0中的融合蛋白。通過(guò)定向克隆的方法獲得了含有RAD9A基因編碼區(qū)的真核表達(dá)載體p EGFP-RAD9A。與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染p EGFP-RAD9A的腎癌786-0細(xì)胞中高效表達(dá)了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的細(xì)胞核。構(gòu)建的RAD9A基因重組真核表達(dá)載體能夠在腎癌細(xì)胞786-0中高效表達(dá),為研究RAD9A在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 湖北理工學(xué)院腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 周期檢測(cè)點(diǎn)蛋白R(shí)ADA 定向克隆 真核細(xì)胞表達(dá)載體 腎癌
【基金】：湖北理工學(xué)院大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):201510920019);湖北理工學(xué)院人才引進(jìn)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):16xjz08R) 湖北省教育廳科學(xué)技術(shù)研究計(jì)劃青年人才項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):000713)
【分類號(hào)】：R737.11;Q78
【正文快照】： 人源RAD9A(RAD9 checkpoint clamp com-ponent A)基因定位于人染色體11 q13.1~q13.2,是裂殖酵母RAD9的同源基因,作為細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)蛋白對(duì)細(xì)胞周期阻滯和DNA損傷修復(fù)具有重要意義[1-3]。這種蛋白具有3'到5'核酸外切酶活性,因此它的功能主要是切除和修復(fù)DNA損傷。在哺乳動(dòng)物中,

【相似文獻(xiàn)】

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6 杜賢進(jìn);藍(lán)舌病毒湖北株選擇性誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞死亡及其機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2010年

7 楊林;腎癌細(xì)胞來(lái)源exosomes的提取鑒定及對(duì)腎癌惡性演進(jìn)的影響和機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

8 畢建斌;腎癌細(xì)胞中環(huán)氧合酶-2的表達(dá)及非甾體類抗炎藥NS398對(duì)腎癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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