菰黑粉菌MAPKK同源基因UeMkk1的全長(zhǎng)克隆及表達(dá)
發(fā)布時(shí)間:2017-06-30 00:13
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【摘要】:菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是菰(Zizania latifolia)植株體內(nèi)的內(nèi)生真菌,其二型態(tài)轉(zhuǎn)換與茭白孕茭密切相關(guān),而絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)途徑在真菌二型態(tài)轉(zhuǎn)換中具有重要調(diào)控作用。本研究利用酵母型及菌絲型菰黑粉菌的差異蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄組分析數(shù)據(jù),克隆了菰黑粉菌中一個(gè)絲裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen activated protein kinase kinase,MAPKK)基因Ue Mkk1(Gen Bank登錄號(hào):KR870332)。該基因c DNA序列全長(zhǎng)2 204 bp,開放閱讀框2 043 bp。與模式菌酵母的MAPK途徑蛋白進(jìn)行聚類分析表明,Ue Mkk1屬于MAPKK蛋白,NCBI中Blast比對(duì)結(jié)果及進(jìn)一步的系統(tǒng)發(fā)育分析表明,Ue Mkk1與黑粉菌屬真菌的Mkk1同源性較高,其中與大麥堅(jiān)黑穗病菌(Ustilago hordei)的MKK1一致性達(dá)到84%,其絲/蘇氨酸雙特異性蛋白激酶催化結(jié)構(gòu)域在不同真菌中高度保守。同時(shí),本研究通過(guò)大腸桿菌(Escherichia coli)原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并從蛋白裂解上清液中純化得到了純度較高的Ue Mkk1蛋白。另外,對(duì)不同碳源誘導(dǎo)后菰黑粉菌的生長(zhǎng)特征觀察及Ue Mkk1的表達(dá)分析表明,蔗糖能誘導(dǎo)菰黑粉菌菌絲的形成及生長(zhǎng),Ue Mkk1的表達(dá)量在菌絲生長(zhǎng)后期下調(diào)表達(dá);PDA、葡萄糖及麥芽糖培養(yǎng)基中菰黑粉菌保持酵母型生長(zhǎng),Ue Mkk1呈周期性上調(diào)表達(dá)。以上研究工作為進(jìn)一步開展Ue Mkk1基因的功能研究,闡明其在菰黑粉菌二型態(tài)轉(zhuǎn)換及茭白孕茭中的作用提供了基礎(chǔ)材料。
【作者單位】: 中國(guó)計(jì)量學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院/浙江省生物計(jì)量及檢驗(yàn)檢疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】: 菰黑粉菌 Ue Mkk 絲裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK) 細(xì)胞壁完整性
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.3147085) 浙江省公益項(xiàng)目(No.2014C32022) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012BAD27B01)
【分類號(hào)】:S645.2
【正文快照】: 菰(Zizania latifolia),多年水生禾本科植物,主要種植于中國(guó)和東南亞地區(qū)。研究表明,菰黑粉菌(Ustilago esculenta)的侵染使菰的莖基部膨大形成可食用的肉質(zhì)莖,稱為茭白(郭得平等,1991),已成為我國(guó)第二大水生蔬菜。菰黑粉菌的生活史與玉米黑粉菌(Ustilago maydis)相似,具有酵
【相似文獻(xiàn)】
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