本文關(guān)鍵詞：普通小麥幾丁質(zhì)酶基因的克隆與表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：幾丁質(zhì)酶是植物重要的防衛(wèi)因子之一,與植物抗病性密切相關(guān)。為深入了解幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)及功能,先利用引物ChiF/ChiR從10份具有不同抗病性的小麥中克隆出幾丁質(zhì)酶基因后對(duì)其進(jìn)行序列分析及原核表達(dá)分析,再利用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)分析小麥根、莖和葉不同組織中幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)情況,并選取在小麥根、莖和葉中表達(dá)量最高的幾丁質(zhì)酶基因進(jìn)行真菌性病害的抗性反應(yīng)試驗(yàn)。結(jié)果表明,從10份具有不同抗病性的小麥中克隆得到5條長(zhǎng)度約960bp的幾丁質(zhì)酶基因序列,其中1條序列與已公布的Chi-3基因序列(序列登錄號(hào)為KJ507387)一致,其余序列命名為Cht1~Cht4(GenBank登錄號(hào)為KR049247~KR049250)。序列分析表明,克隆所得序列無(wú)內(nèi)含子,編碼的幾丁質(zhì)酶屬于ClassⅠb類型,也屬于糖苷水解酶第19家族,是胞外分泌蛋白且兼具溶菌酶活性。SDS-PAGE分析表明,重組質(zhì)粒pE-Chi能在BL21(DE3)中表達(dá)一個(gè)33kDa左右的特異蛋白。qRT-PCR分析表明,這5種幾丁質(zhì)酶基因在小麥根、莖和葉中均有表達(dá),但在不同器官中表達(dá)量差異較大,其中,葉中表達(dá)量最高,根中次之,莖中最低;同時(shí),這5種幾丁質(zhì)酶基因在同一器官中表達(dá)量大小具體表現(xiàn)為Cht4Cht2Cht3Cht1Chi-3。選取相對(duì)表達(dá)量最高的Cht4基因驗(yàn)證其對(duì)真菌性病害的抗性反應(yīng),結(jié)果表明,在條銹菌脅迫下,Cht4基因在抗病材料92R137中的表達(dá)量顯著高于感病材料銘賢169,并且均高于同等條件下接ddH2O的表達(dá)量。本研究擴(kuò)增到的幾丁質(zhì)酶基因在小麥中組成型表達(dá),說(shuō)明其參與了小麥的正常生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程;Cht4基因的表達(dá)受條銹菌誘導(dǎo),推測(cè)其可能參與了小麥葉部抗條銹菌的防御反應(yīng)。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院;陜西省小麥新品種培育工程研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 小麥 幾丁質(zhì)酶 原核表達(dá) 組織表達(dá) 功能分析
【基金】：“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011AA100501) 國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-3-2-47)
【分類號(hào)】：S512.1
【正文快照】： 由真菌引起的小麥病害嚴(yán)重影響小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)能夠水解菌絲生長(zhǎng)初期細(xì)胞壁中的幾丁質(zhì),對(duì)真菌具有廣譜抗性[1-3]。目前,已在水稻、小麥、大麥和棉花等100多種植物中檢測(cè)到幾丁質(zhì)酶活性[4]。正常情況下,植物體內(nèi)幾丁質(zhì)酶的含量很低,甚至不表達(dá),但當(dāng)

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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【相似文獻(xiàn)】

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3 馮玉蘭;用于單子葉植物轉(zhuǎn)化的幾丁質(zhì)酶基因載體構(gòu)建及玉米再生體系建立[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：普通小麥幾丁質(zhì)酶基因的克隆與表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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