本文關(guān)鍵詞：三角梅品種資源調(diào)查及若干成花相關(guān)基因的表達(dá)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：三角梅(Bougainvillea spectabilis Willd)具有很高的觀賞價(jià)值,常用于園林造景和綠化美化栽植,是廈門的市花,本文采用文獻(xiàn)索引、走訪調(diào)查、典型訪談、評(píng)價(jià)研究等方法,對(duì)三角梅的不同花色品種的觀賞性進(jìn)行初探；并從轉(zhuǎn)錄和生化水平上,闡明三角梅苞片色澤形成、成花的分子機(jī)制,對(duì)于三角梅苞片開花色澤基因的調(diào)控及開發(fā)利用,具有重要的理論和實(shí)踐意義。主要研究結(jié)果如下：1.建立了三角梅品種觀賞性狀綜合評(píng)價(jià)體系：通過利用層次分析軟件構(gòu)建具有相互關(guān)系三角梅多層次分析模型,對(duì)三角梅品種進(jìn)行生物學(xué)特性的綜合評(píng)價(jià)分析,將三角梅品種的綜合評(píng)價(jià)分值劃分為4個(gè)等級(jí)(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),其觀賞價(jià)值排序依次為：‘帝國(guó)喜悅’‘脂鯉’‘巴特夫人’‘瓶刷橙’‘歡歡喜’‘斑葉紅衣王后’‘法蒂瑪’‘金色輝光’‘橙斑’‘灰姑娘’‘粉紅小精靈’‘巴頓美女’‘伊麗莎白·安格斯’‘辛格博士’‘紅色達(dá)尼亞’‘福摩薩’‘翡翠’‘貝古姆西砍德’‘椰子糖’‘蘇克哈’‘條紋白’�；ㄉ�、葉片色澤、花量仍舊是影響三角梅觀賞價(jià)值的主要因素�！蹏�(guó)喜悅’、‘脂鯉’品種因稀有度較高、生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng),‘巴特夫人’因指標(biāo)平均評(píng)價(jià)值都較高排列前三。2.構(gòu)建了三角梅苞片富含全長(zhǎng)的均一化cDNA文庫(kù)：以三角梅‘帝國(guó)喜悅’苞片為材料,利用抑制LA-PCR與DSN處理相結(jié)合的方法,構(gòu)建了富含全長(zhǎng)的均一化cDNA文庫(kù),該文庫(kù)的滴度為9.0×106 cfu/mL,庫(kù)容量為5.0× 107,空載率3%,插入片段的大小涵蓋0.5-3.0 kb,平均插入片段大小約為1.5 kb,滿足測(cè)序和EST分析的要求。通過EST分析,找出了1個(gè)與三角梅苞片色澤形成的基因黃烷酮-3-羥化酶(F3H)、2個(gè)含MADS-box的成花基因(APl和AG6)及1個(gè)與光周期誘導(dǎo)開花具有鋅指結(jié)構(gòu)蛋白的基因(COL)。3三角梅苞片F(xiàn)3H、AP1、AG6和COL的生物信息學(xué)分析及其表達(dá)分析：測(cè)序結(jié)果表明,三角梅苞片F(xiàn)3HcDNA全長(zhǎng)為1330 bp,包含164bp的3'-UTR、 6bp的5/-UTR和1146bp的ORF,該基因編碼的蛋白由381個(gè)氨基酸組成,含有DIOX_N和20G-FeII_Oxy兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域,BLAST分析結(jié)果表明,該基因在氨基酸序列上與芝麻和柑橘的同源性分別為59%和59%,可以初步推測(cè),該基因?yàn)槿敲稦3H的同源基因；熒光定量PCR結(jié)果表明,該基因在三角梅苞片不同發(fā)育階段,其表達(dá)含量存在差異,在苞片發(fā)育的早期,F3H就大量表達(dá),表達(dá)量處于較高水平,之后出現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì),說明F3H的表達(dá)與三角梅苞片的色澤形成相關(guān)。經(jīng)測(cè)序,三角梅苞片API cDNA全長(zhǎng)為1247 bp,包含253bp的3'-UTR、226bp的5/-UTR和743bp的ORF,該基因所編碼的蛋白由247個(gè)氨基酸組成,具有典型的MADS-box和K-box兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,BLAST分析結(jié)果表明,該基因在氨基酸序列上與菠菜、茶樹和葡萄的同源性較高,分別為82%、75%和74%,可以推測(cè),該基因?yàn)槿敲稟Pl的同源基因；熒光定量PCR結(jié)果表明,該基因在三角梅苞片的不同時(shí)期都有表達(dá),在苞片初期表達(dá)量較高,隨著苞片的生長(zhǎng),表達(dá)含量逐漸降低。測(cè)序結(jié)果表明,三角梅苞片AG6 cDNA全長(zhǎng)為1124 bp,包含29bp的5'-UTR、228bp的3/-UTR和801bp的ORF,該基因所編碼的蛋白由267個(gè)氨基酸組成,具有MADS-box和K-box兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,BLAST分析結(jié)果表明,該基因在氨基酸序列上與甜菜的同源性為72%,可以初步推測(cè),該基因?yàn)槿敲稟G6的同源基因；熒光定量PCR結(jié)果表明,在三角梅苞片形成與發(fā)育的不同階段,該基因的表達(dá)均有有差異,在苞片發(fā)育初期,其表達(dá)量最高,隨著苞片生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)色,其表達(dá)量出現(xiàn)降低,在苞片停止生長(zhǎng)后,其表達(dá)量卻出現(xiàn)升高。由于本研究分離的三角梅APl和AG6,均具有成花基因的保守結(jié)構(gòu)域(MADS-box和K-box),且在苞片發(fā)育初期,其表達(dá)量均很高,之后出現(xiàn)下降,因此,這兩個(gè)基因很可能與三角梅的成花密切相關(guān)。測(cè)序結(jié)果表明,三角梅苞片COL cDNA全長(zhǎng)為1364 bp,包含95bp的5/-UTR、259bp的3/-UTR和1090bp的ORF,該基因所編碼的蛋白由364個(gè)氨基酸組成,在其N和C端分別有一個(gè)CCT結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)K-box保守結(jié)構(gòu)域,屬BBX蛋白,BLAST結(jié)果表明,該基因在氨基酸序列上與甜菜的同源性為74%,可以初步推測(cè),該基因?yàn)槿敲稢OL的同源基因,且與光周期誘導(dǎo)開花有關(guān)；熒光定量PCR結(jié)果表明,該基因在三角梅苞片不同發(fā)育時(shí)期均有表達(dá),在苞片發(fā)育初期就大量表達(dá),但表達(dá)含量差異不大。
【關(guān)鍵詞】：三角梅 層次分析模型 均一化 全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S685.99
【目錄】：

• 縮略詞7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 第一章 前言13-19
• 1. 選題的目的與意義13
• 2. 文獻(xiàn)綜述13-17
• 2.1 國(guó)內(nèi)外的研究現(xiàn)狀14-16
• 2.2 存在的問題16-17
• 3. 本研究主要內(nèi)容17-19
• 第二章 三角梅優(yōu)質(zhì)品種資源的綜合評(píng)價(jià)19-30
• 1 評(píng)價(jià)方法19-21
• 1.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的確立19
• 1.2 綜合評(píng)價(jià)的層次分析模型的構(gòu)造19-20
• 1.3 層次分析模型方案層的選擇20-21
• 2 結(jié)果與分析21-30
• 2.1 AHP層次判斷矩陣構(gòu)建及判斷矩陣的一致性檢驗(yàn)21-24
• 2.2 一致性檢驗(yàn)24-25
• 2.3 層次權(quán)重總排序25-26
• 2.4 因子評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的確定26-27
• 2.5 結(jié)論27-30
• 第三章 三角梅苞片均一化全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的EST分析與苞片成花相關(guān)基因的表達(dá)分析30-50
• 1 材料與方法30-33
• 1.1 試驗(yàn)材料30
• 1.2 主要藥品、試劑盒及儀器30
• 1.3 試驗(yàn)方法30-33
• 1.3.1 三角梅苞片總RNA的提取31
• 1.3.2 三角梅苞片均一化全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建31
• 1.3.3 三角梅苞片均一化全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的EST分析31
• 1.3.4 三角梅苞片花色和成花相關(guān)基因的生物信息學(xué)分析31-32
• 1.3.5 三角梅苞片花色和成花相關(guān)基因的熒光定量PCR檢測(cè)32-33
• 2 結(jié)果與分析33-50
• 2.1 三角梅苞片均一化cDNA文庫(kù)的質(zhì)量評(píng)價(jià)33-36
• 2.2 三角梅苞片F(xiàn)3H、AP1、AG6和COL的生物信息學(xué)分析36-47
• 2.2.1 三角梅苞片F(xiàn)3H的生物信息學(xué)分析36-39
• 2.2.2 三角梅苞片AP1的生物信息學(xué)分析39-41
• 2.2.3 三角梅苞片AG6的生物信息學(xué)分析41-44
• 2.2.4 三角梅苞片COL的生物信息學(xué)分析44-47
• 2.3 三角梅苞片F(xiàn)3H、AP1、AG6和COL在三角梅苞片不同發(fā)育階段的表達(dá)47-50
• 2.3.1 F3H在三角梅苞片不同發(fā)育階段的表達(dá)48
• 2.3.2 AP1在三角梅苞片不同發(fā)育階段的表達(dá)48-49
• 2.3.3 AG6在三角梅苞片不同發(fā)育階段的表達(dá)49
• 2.3.4 COL在三角梅苞片不同發(fā)育階段的表達(dá)49-50
• 第四章 討論與結(jié)論50-54
• 1 討論50-53
• 2 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59-60
• 附錄 三角梅品種圖片60-62

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