本文關(guān)鍵詞：中華蜜蜂CREB基因的克隆及表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】克隆中華蜜蜂(Apis cerana cerana)的c AMP反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(c AMP response element binding protein,CREB)基因全長c DNA序列,預(yù)測該基因及其編碼蛋白的理化性質(zhì),并解析中華蜜蜂CREB在大腦中的表達(dá)特征,為研究該基因在中華蜜蜂學(xué)習(xí)記憶過程中的生物學(xué)功能提供基礎(chǔ)�！痉椒ā恳灾腥A蜜蜂為試驗(yàn)材料,解剖其大腦獲得腦組織,提取大腦組織的總RNA。在此基礎(chǔ)上,利用RT-PCR技術(shù)克隆中華蜜蜂大腦的CREB基因(Ac CREB),然后用DNAstar軟件中的Seqman程序?qū)REB正反向測序后的序列拼接獲得CREB基因的c DNA序列,其氨基酸序列通過Bioedit軟件按照六框翻譯而成;用BLASTn和BLASTp進(jìn)行序列比對分析;用Clustal X進(jìn)行多重序列比對和同源性比較;用MEGA軟件的鄰接法(neighbor-joining)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,明確其系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系。并通過SMART數(shù)據(jù)庫分析Ac CREB的結(jié)構(gòu)域。另外,將解剖好的蜜蜂大腦制成石蠟切片,并采用地高辛原位雜交技術(shù)分析Ac CREB在中華蜜蜂大腦中的分布表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】中華蜜蜂CREB基因的c DNA全序列全長890 bp,編碼240個(gè)氨基酸殘基,序列提交到Gen Bank(登錄號(hào)為KC814690)。其編碼的蛋白預(yù)測分子質(zhì)量為25.691 k D,等電點(diǎn)為5.82。結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果顯示,該蛋白具有AA 89—131的PKID和AA 176—237的BRLA兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列比對結(jié)果顯示,中華蜜蜂與西方蜜蜂、熊蜂、切葉蜂、大黃蜂、印度跳蟻、家蠶、埃及伊蚊、瘧原蟲、人類、小鼠10個(gè)物種的同源蛋白相似度分別為98.76%、98.35%、97.11%、94.09%、72.22%、58.97%、44.69%、41.69%、36.89%、36.89%。系統(tǒng)發(fā)育樹顯示該基因編碼的蛋白質(zhì)與西方蜜蜂的CREB親緣關(guān)系最近,與熊蜂、大黃蜂之間的親緣關(guān)系次之。另外,經(jīng)過地高辛原位雜交技術(shù)處理后,在中蜂大腦蘑菇體的凱尼恩細(xì)胞、觸角葉周圍的細(xì)胞和大腦的髓質(zhì)與小葉之間的細(xì)胞均有陽性著色,而且Ac CREB在中華蜜蜂工蜂左右大腦的陽性著色不對稱。【結(jié)論】Ac CREB的氨基酸序列與西方蜜蜂、熊蜂、切葉蜂、大黃蜂高度同源,且基因在大腦中的分布暗示其可能參與了中華蜜蜂學(xué)習(xí)記憶過程。
【作者單位】： 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)蜜蜂研究所;
【關(guān)鍵詞】： 中華蜜蜂 CREB基因 克隆 表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31260524) 國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-45-kxj12) 教育部博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20123603120005)
【分類號(hào)】：S891;Q78
【正文快照】： 0引言【研究意義】蜜蜂是一種資源共享、精確分工和信息交流的高度結(jié)構(gòu)化社會(huì)化群體昆蟲,是繼果蠅后又一個(gè)重要的模式昆蟲。盡管蜜蜂的大腦體積小,但少量的大腦神經(jīng)細(xì)胞控制著大量的復(fù)雜行為[1]。隨著生物遺傳學(xué)的發(fā)展,使人們可以從分子水平上了解蜜蜂學(xué)習(xí)記憶的機(jī)制,而對蜜蜂

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本文編號(hào)：487369