本文關(guān)鍵詞：病毒誘導(dǎo)基因沉默鑒定穿心蓮內(nèi)酯生物合成關(guān)鍵酶ApCPS功能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：該研究采用病毒誘導(dǎo)基因沉默技術(shù)(VIGS),以生長到第8片真葉期的穿心蓮植株為實驗材料,沉默參與穿心蓮內(nèi)酯生物合成的ent-柯巴基焦磷酸合酶基因(ApCPS),用半定量和熒光定量PCR檢測病毒誘導(dǎo)沉默后ApCPS及其上游基因的表達,用HPLC法檢測ApCPS沉默后穿心蓮內(nèi)酯的積累變化,同時檢測茉莉酸甲酯(MeJA)處理后ApCPS及上游基因的表達,以全面分析穿心蓮內(nèi)酯代謝以及ApCPS在穿心蓮內(nèi)酯生物合成中的作用機制,驗證其在植物體內(nèi)的功能。結(jié)果顯示:(1)ApCPS基因被成功沉默,基因表達顯著下調(diào),進而引起上游r{牛兒基r{牛兒基焦磷酸合成酶基因(GGPS)的表達下調(diào),而3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶基因(HMGR)和1-脫氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因(DXS)的表達未受影響。(2)ApCPS基因沉默15d后穿心蓮內(nèi)酯積累量顯著下降,表明ApCPS是穿心蓮內(nèi)酯生物合成關(guān)鍵酶基因,且能夠負反饋影響上游基因表達。(3)茉莉酸甲酯(MeJA)顯著誘導(dǎo)ApCPS及上游基因HMGR、DXS和GGPS的表達,表明穿心蓮內(nèi)酯生物合成基因受到MeJA的廣泛調(diào)控。該研究首次使用VIGS證明ApCPS參與到穿心蓮內(nèi)酯生物合成,為利用該技術(shù)鑒定穿心蓮內(nèi)酯生物合成途徑中其他基因功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)農(nóng)業(yè)研究所;四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： VIGS ent-柯巴基焦磷酸合酶 穿心蓮內(nèi)酯 生物合成 基因表達
【基金】：四川省杰出青年基金(2014JQ0038)
【分類號】：Q943.2
【正文快照】： 中藥穿心蓮是爵床科穿心蓮屬植物穿心蓮[Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees]的干燥地上部分,又名一見喜、印度草、欖核蓮,味苦,是清熱解毒、抗菌消炎之要藥[1]。現(xiàn)代藥理研究表明穿心蓮具有抗腫瘤[2-3]、抗病毒[4]、免疫調(diào)節(jié)及肝保護作用[5]等,主要藥效成分是穿心蓮內(nèi)酯和

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1 鹿萍;丁

本文編號：483383