楊樹SAMT基因超表達載體的構建及遺傳轉化
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【摘要】:一年生草本植物受到病原菌侵染時,體內(nèi)的水楊酸甲基轉移酶基因(salicylic acid methyltransferase,SAMT)能將植物侵染部位產(chǎn)生的水楊酸(salicylic acid,SA)轉化為水楊酸甲酯(methyl salicylate,Me SA),在SA信號轉導和植物系統(tǒng)獲得抗性(systemic acquired resistance,SAR)中起著重要作用。而多年生木本植物中SAMT基因的功能還有待進一步驗證。本研究根據(jù)毛果楊(Populus trichocarpa)SAMT基因序列,設計了84K楊SAMT引物,利用Gateway克隆技術,在BP反應酶作用下,使帶att B接頭的SAMT基因全長開放閱讀框與入門載體p DONRTM222進行BP重組反應,將目的基因轉入入門載體;轉化大腸桿菌(Escherichia coli)感受態(tài)細胞DH5α后提取的質粒用MLUⅠ進行酶切,然后在LR酶作用下與超表達載體p MDC32進行LR重組反應,將SAMT轉入表達載體,成功構建了SAMT的超表達載體。通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導的遺傳轉化,獲得了SAMT超表達的84K楊轉基因植株。為今后研究該基因在楊樹抗?jié)儾≈械墓δ芤约皸顦湓讷@得SAR和其他方面的作用提供了基礎資料,同時也為研究該基因在其他多年生木本植物中的功能提供參考。
【作者單位】: 中國林業(yè)科學研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護研究所/國家林業(yè)局森林保護學重點實驗室;河南師范大學生命科學學院;中國林業(yè)科學研究院林業(yè)新技術研究所;南京林業(yè)大學南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關鍵詞】: K楊 水楊酸甲基轉移酶基因(SAMT) 超表達 載體構建 遺傳轉化
【基金】:林業(yè)公益性行業(yè)科研專項經(jīng)費(No.201204501) 中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項資金項目(No.CAFYBB2014MB002)
【分類號】:S792.11
【正文快照】: 楊樹(Populus spp.)是世界上栽培最廣泛的樹種之一,但病害的發(fā)生和發(fā)展也相當嚴重,已成為其主要的種植障礙(沈瑞祥,1989)。我國是世界上楊樹人工林栽培面積最大的國家(曾大鵬,2002),在我國森林重大生物災害界定的19類災害中,楊樹占6類,其中由葡萄座腔菌(Botryosphaeria do-thi
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本文編號:478537
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