本文關(guān)鍵詞：一株偽狂犬病病毒的分離鑒定及其gE基因的遺傳進(jìn)化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV;Aujeszky’disease virus,ADV),屬于皰疹病毒科(Herpesvirdae)α-皰疹病毒亞科,PRV可感染多種家畜及野生動物,其中豬最易感,也最為嚴(yán)重,是該病毒的自然宿主和貯存者。PRV可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,被我國列為2類傳染病。當(dāng)前,國內(nèi)使用的PRV疫苗有豬偽狂犬弱毒疫苗、野毒滅活苗和基因工程缺失疫苗。疫苗的廣泛使用有效地控制了PR的流行,部分國家依靠疫苗已經(jīng)逐漸消滅了PR,我國也在2010年前基本控制了PR。但自2011年以來,童光志、田志軍、李學(xué)伍和陳煥春等相繼報(bào)道了在吉林、黑龍江、河南和山東等多個省份免疫豬群暴發(fā)PR的病例。發(fā)病豬場公豬出現(xiàn)體溫升高、陰囊炎,母豬屢配不孕或者配種后產(chǎn)弱仔、死胎或流產(chǎn),仔豬腹瀉、伴發(fā)神經(jīng)癥狀和高死亡率。張青占、趙鴻遠(yuǎn)和潘宵等分別從河南、黑龍江、江蘇和吉林等多個省份發(fā)病的免疫豬場中分離到PRV,且實(shí)驗(yàn)證明部分分離株為變異PRV強(qiáng)毒株,表明現(xiàn)有疫苗不能完全保護(hù)免疫豬群,仍有暴發(fā)PR疫情的可能。近幾年,陜西省豬群PR發(fā)生的頻率呈上升趨勢,為分析陜西省豬群PR的流行情況,本研究對陜西省12家規(guī)�；i場進(jìn)行了采樣和PRV檢測,并對其中某疑似發(fā)生PR的豬場進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷和病毒分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析,研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.陜西省規(guī)�；i場PRV感染狀況的調(diào)查。選取陜西省具有地域代表性的12個PR免疫過的豬場,隨機(jī)采取經(jīng)產(chǎn)母豬血樣,分離血清,共獲得血清樣品78份,使用PCR和ELISA PRV-g E抗體檢測方法對血清樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示,4個豬場PRV PCR檢測陽性,占抽檢豬場的33.33%;14份血清PRV PCR檢測陽性,占檢測樣品數(shù)的17.95%;5個豬場PRV g E抗體陽性,占抽檢豬場的41.46%;17份血清PRV g E抗體陽性,占檢測樣品數(shù)的21.79%。2.發(fā)病場豬PR的診斷及PRV的分離鑒定。2015年10月陜西某豬場暴發(fā)疑似PR的疫情,采取發(fā)病仔豬的血液、腦、脊髓、肝臟和脾臟,通過ELISA、PCR、動物試驗(yàn)等對病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷,最終確定為PRV感染。將病料處理后接種BHK-21細(xì)胞進(jìn)行PRV分離,經(jīng)連續(xù)6次傳代,細(xì)胞出現(xiàn)病變規(guī)律穩(wěn)定,獲得效價穩(wěn)定的病毒,測定TCID50為10-5.386/0.1m L。通過PCR檢測、家兔接種、雞胚接種等試驗(yàn)對病毒進(jìn)行了進(jìn)一步鑒定,鑒定為PRV,將其命名為SX-10-2015。3.PRV SX-10-2015株g E基因的擴(kuò)增與序列分析。為進(jìn)一步研究PRV陜西分離株SX-10-2015的遺傳進(jìn)化地位,對分離株g E基因進(jìn)行了擴(kuò)增和測序,將獲得的g E基因序列與近些年來流行的PRV毒株、本實(shí)驗(yàn)室2006年分離的WG株、以及國內(nèi)外經(jīng)典PRV毒株的g E基因序列進(jìn)行了同源性比對分析,并構(gòu)建了遺傳進(jìn)化樹。結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離株SX-10-2015與國內(nèi)近年的PRV流行毒株GD-4-2013株、JN和WZ株遺傳距離較近,屬同一分支;與國外Kaplan、Ni A3和00V7分離株遺傳距離較遠(yuǎn),屬于不同分支;分離毒株SX-10-2015的g E基因編碼氨基酸同源性分析顯示與GD-4-2013分離株和He N1分離株同源性分別為99.7%和99.3%;而其與Ea和FA PR疫苗株g E氨基酸同源性分別為99.3%、98.8%和98.8%。以上研究結(jié)果提示,陜西省規(guī)模化豬場PRV陽性率和豬個體PRV陽性率均較高;分離的SX-10-2015株g E毒力基因核苷酸和氨基酸序列與近年報(bào)道的變異株同源性較高,遺傳進(jìn)化地位更近,但其氨基酸同源性與國內(nèi)疫苗毒株Ea和FA同源性也高達(dá)98.8%,疫苗免疫能否為SX-10-2015株提供免疫保護(hù)仍需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：豬偽狂犬病病毒 毒力 遺傳進(jìn)化 gE基因
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 偽狂犬病綜述11-21
• 1.1 偽狂犬病簡介11-12
• 1.1.1 病原簡介11
• 1.1.2 偽狂犬病的臨床癥狀11-12
• 1.1.3 偽狂犬病的病理變化12
• 1.1.4 偽狂犬病的流行病學(xué)12
• 1.2 偽狂犬病的診斷12-13
• 1.3 PRV的分子生物學(xué)特征13-14
• 1.3.1 狂犬病病毒的分子結(jié)構(gòu)13
• 1.3.2 主要基因及編碼的蛋白13-14
• 1.4 PRV的理化特性14-15
• 1.5 偽狂犬病病毒的致病機(jī)理15
• 1.6 PRV疫苗研究進(jìn)展15-17
• 1.6.1 傳統(tǒng)疫苗16
• 1.6.2 偽狂犬病基因缺失疫苗16-17
• 1.6.3 重組疫苗17
• 1.6.4 亞單位疫苗17
• 1.7 偽狂犬病的綜合防控措施17-19
• 1.7.1 美國偽狂犬病根除計(jì)劃的經(jīng)驗(yàn)18
• 1.7.2 荷蘭偽狂犬病根除計(jì)劃的經(jīng)驗(yàn)18-19
• 1.7.3 我國偽狂犬病根除計(jì)劃的研究19
• 1.8 本研究的目的意義19-21
• 第二章 陜西省部分規(guī)�；i場偽狂犬病病毒感染狀況的調(diào)查21-25
• 2.1 試驗(yàn)儀器和試劑21
• 2.2 方法21-23
• 2.2.1 陜西省部分豬場豬PRV感染狀況的調(diào)查21
• 2.2.2 血清樣品的采集21
• 2.2.3 樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測21-23
• 2.3 結(jié)果23-24
• 2.4 討論24
• 2.5 小結(jié)24-25
• 第三章 陜西省發(fā)病豬場豬PRV的分離鑒定25-37
• 3.1 材料25-26
• 3.1.1 主要試劑25
• 3.1.2 主要儀器25-26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 病料采集26
• 3.2.2 血清學(xué)抗體檢測26
• 3.2.3 病原學(xué)檢測26
• 3.2.4 細(xì)菌學(xué)試驗(yàn)26
• 3.2.5 動物試驗(yàn)26-27
• 3.2.6 陽性病料接種BHK-21 細(xì)胞27
• 3.2.7 細(xì)胞培養(yǎng)物的鑒定27-28
• 3.3 結(jié)果28-35
• 3.3.1 剖解及病料的采集28-29
• 3.3.2 血清學(xué)抗體檢測結(jié)果29-30
• 3.3.3 病原學(xué)檢測結(jié)果30
• 3.3.4 細(xì)菌學(xué)試驗(yàn)30
• 3.3.5 動物試驗(yàn)30-32
• 3.3.6 陽性病料接種BHK-21 細(xì)胞32-33
• 3.3.7 細(xì)胞培養(yǎng)物的鑒定33-35
• 3.4 討論35-36
• 3.5 小結(jié)36-37
• 第四章 偽狂犬病病毒（SX102015）株g E基因的進(jìn)化分析37-50
• 4.1 材料和方法37-42
• 4.1.1 毒株、菌株、質(zhì)粒37
• 4.1.2 主要儀器37-38
• 4.1.3 主要試劑及培養(yǎng)基的配制38-39
• 4.1.4 引物的設(shè)計(jì)與合成39
• 4.1.5 偽狂犬病病毒DNA的提取39-40
• 4.1.6 偽狂犬病病毒g E全基因的PCR擴(kuò)增40-41
• 4.1.7 連接和轉(zhuǎn)化41
• 4.1.8 菌落PCR鑒定及陽性克隆的測序41-42
• 4.1.9 測序結(jié)果使用分子生物學(xué)軟件分析42
• 4.2 結(jié)果42-47
• 4.2.1 分離株SX102015 株g E基因PCR擴(kuò)增結(jié)果42
• 4.2.2 PRV分離株菌液PCR結(jié)果42-43
• 4.2.3 g E基因陽性克隆的測序結(jié)果43-44
• 4.2.4 測序結(jié)果使用分子生物學(xué)軟件分析44-47
• 4.3 討論47-49
• 4.4 小結(jié)49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 作者簡介57

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 代卓見;偽狂犬病病毒分子生物學(xué)研究新進(jìn)展[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1996年01期

2 王家富,張光道,丁建華,羅滿林,張楚瑜;偽狂犬病病毒gⅢ基因的克隆及其鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);1997年04期

3 懷濟(jì)森,陳煥春;偽狂犬病病毒潛伏感染的研究[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1997年03期

4 閻高峰,李健強(qiáng);抗偽狂犬病病毒單克隆抗體的應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1999年01期

5 閻高峰,李健強(qiáng);抗偽狂犬病病毒單克隆抗體的特性鑒定[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1999年04期

6 邵偉娟,胡建華,謝建云,高誠,張婉華;偽狂犬病病毒滬株gE基因序列測定與比較分析[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2005年04期

7 殷華平;郭萬柱;徐志文;楊麗;;影響偽狂犬病病毒同義密碼子用法特點(diǎn)的因素分析[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2007年03期

8 呂建強(qiáng);何云蔚;盧體康;花群義;秦智鋒;陶虹;楊俊興;阮周曦;;偽狂犬病病毒實(shí)時熒光PCR的建立和應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年03期

9 何妍萍;賈懷杰;王盈盈;劉太安;景志忠;;偽狂犬病病毒載體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2013年10期

10 閻高峰;偽狂犬病病毒毒力基因研究進(jìn)展[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1998年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙鳳云;涂長春;張玉靜;歐陽紅生;張永亮;劉思國;劉伯華;;偽狂犬病病毒基因缺失突變體的克隆與測序[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

2 李富強(qiáng);張莉;劉尚高;王雙山;靳玉芬;歐陽素貞;;偽狂犬病病毒北京株的純化及電鏡觀察[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

3 崔保安;付元帥;張素梅;魏戰(zhàn)勇;楊明凡;;金銀花對偽狂犬病病毒體外抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

4 呂素芳;郭廣君;魏鳳;唐娜;沈志強(qiáng);;重組偽狂犬病病毒疫苗的研究進(jìn)展[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

5 胡勤芹;馬相如;陳煥春;;偽狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)蛋白與功能[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

6 湯德元;郝飛;李春燕;曾智勇;羅險(xiǎn)峰;甘振磊;劉建;王洪光;;偽狂犬病病毒Guizhou-DY株的分離鑒定及致病性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

7 郭廣君;呂素芳;肖躍強(qiáng);畢研麗;沈志強(qiáng);丁壯;;偽狂犬病病毒Us3基因編碼蛋白的功能研究進(jìn)展[A];第五屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2011年

8 婁高明;敖敬群;廖筱萍;王殉章;;偽狂犬病病毒閩A株糖蛋白gC基因全序列的克隆與分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

9 劉慶偉;邱亞峰;王曉杜;郭林;劉超;沈陽;李向東;單虎;馬志永;;抗PRV gC抗體制備及PRV gC表達(dá)的分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 敖敬群;婁高明;陳新華;廖筱萍;楊林;杜偉賢;龍綮新;王s閼，

本文編號：433739