枯草芽孢桿菌屬于食品安全級微生物(GRAS),廣泛應(yīng)用于生物防治、食品發(fā)酵、工業(yè)蛋白酶生產(chǎn)等。醬香是一種復(fù)合香,B.subtilis是醬香形成的主要微生物,迄今為止,醬香形成的分子機(jī)制仍不清楚。為探索醬香產(chǎn)生機(jī)制,研究通過對產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌BJ3-2和不產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌10075的3代基因組測序和轉(zhuǎn)錄組測序進(jìn)行差異性分析,篩選得到9個醬香風(fēng)味酶基因,確立靶基因rocG(谷氨酸脫氫酶)。結(jié)合實(shí)驗(yàn)室前期研究驗(yàn)證的醬香風(fēng)味酶基因alsS(乙酰乳酸合成酶),針對兩個靶基因rocG和als S,構(gòu)建了四個CRISPR/Cas9敲除載體,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.通過產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌BJ3-2與不產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌10075共性蛋白對比,初步分析醬香風(fēng)味的形成可能與基因重排有關(guān)。2.分析3代基因組測序和2代轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,通過比較產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌BJ3-2和不產(chǎn)醬香枯草芽孢桿菌10075的基因組差異,基因表達(dá)量差異,結(jié)合模式菌株B.subtilis168和GO、KEGG等數(shù)據(jù)庫,篩選獲得醬香風(fēng)味酶基因speD、rocF、hutG、PRODH、celF、hutI、celB、OxdD、rocG...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 前言
    1.1 醬香風(fēng)味及其研究現(xiàn)狀
        1.1.1 醬香風(fēng)味形成機(jī)制
        1.1.2 醬香風(fēng)味物質(zhì)
        1.1.3 醬香風(fēng)味物質(zhì)研究進(jìn)展
    1.2 枯草芽孢桿菌醬香風(fēng)味酶基因
        1.2.1 醬香風(fēng)味酶基因的篩選方法
        1.2.2 醬香風(fēng)味酶基因
    1.3 CRISPR/Cas技術(shù)
        1.3.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的組成
        1.3.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的分類
        1.3.3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用機(jī)制
        1.3.4 CRISPR/Cas系統(tǒng)在微生物中的應(yīng)用進(jìn)展
    1.4 研究的目的及意義
第二章 醬香風(fēng)味酶基因的篩選
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基及試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株培養(yǎng)
        2.2.2 基因組測序
        2.2.3 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.4 基因組測序結(jié)果分析
        2.2.5 轉(zhuǎn)錄組測序分析
        2.2.6 醬香風(fēng)味候選基因的篩選
        2.2.7 醬香風(fēng)味差異基因的篩選
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 基因組測序結(jié)果及分析
        2.3.2 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果及分析
        2.3.3 醬香風(fēng)味候選基因
        2.3.4 醬香風(fēng)味差異基因rocG
    2.4 討論
第三章 醬香風(fēng)味酶基因alsS和rocGCRISPR/Cas9載體的構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 載體
        3.1.3 主要藥品及試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.5 培養(yǎng)基及試劑的配制
        3.1.6 PCR擴(kuò)增引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 p43/sgRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.2.2 p43/sgRNA/donor重組質(zhì)粒的構(gòu)建與驗(yàn)證
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 alsS,rocG基因序列
        3.3.2 p43/sgRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.3.3 p43/sgRNA/donor重組質(zhì)粒的構(gòu)建與驗(yàn)證
    3.4 討論
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：4023764