蕓薹生鏈格孢（Alternaria brassicicola）是十字花科蔬菜的一個(gè)重要致病真菌,其侵染引起的黑斑病會(huì)導(dǎo)致十字花科蔬菜產(chǎn)、質(zhì)量嚴(yán)重下降。對(duì)該病原菌致病機(jī)理的深入研究有助于黑斑病的防治。藍(lán)光對(duì)病原菌的生長(zhǎng)發(fā)育、有性生殖及無(wú)性生殖、體內(nèi)的新陳代謝、產(chǎn)孢以及致病力等方面均能起到重要調(diào)控作用。因此,本研究從致病缺陷突變體AbS4b入手,明確其突變基因?yàn)樗{(lán)光調(diào)節(jié)蛋白基因Abblr,進(jìn)一步對(duì)該基因的功能進(jìn)行了研究,結(jié)果如下:（1）利用離體葉片接種法對(duì)蕓薹生鏈格孢轉(zhuǎn)化子庫(kù)進(jìn)行致病缺陷突變體的篩選,共得到5株致病能力顯著下降的突變體,其中致病能力完全喪失的有2株,分別是AbM1a和AbS4b;致病能力明顯下降的有3株,分別為AbF7a、AbS2b、AbS3b。利用hiTAIL-PCR技術(shù)成功擴(kuò)增到了突變體AbS4b的質(zhì)粒插入基因?yàn)樗{(lán)光調(diào)節(jié)蛋白基因,將其命名為Abblr（Alternaria brassicicola blue light regulator）。（2）Abblr基因全長(zhǎng)1432 bp,含有一個(gè)52 bp的內(nèi)含子,編碼459個(gè)氨基酸,包含一個(gè)PAS結(jié)構(gòu)域和一個(gè)ZnF_G...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 蕓薹生鏈格孢與黑斑病
    1.2 蕓薹生鏈格孢菌的致病機(jī)制
    1.3 藍(lán)光受體蛋白概述
        1.3.1 真菌與藍(lán)光響應(yīng)
        1.3.2 White Collar系同源物(WC)
        1.3.3 藍(lán)光受體相關(guān)基因的功能研究
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 供試菌株與培養(yǎng)條件
        2.1.2 質(zhì)粒載體
        2.1.3 主要試驗(yàn)試劑
        2.1.4 主要溶劑及培養(yǎng)基的配制
        2.1.5 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.6 PCR引物序列
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 突變體的篩選
        2.2.2 CTAB法提取全基因組DNA
        2.2.3 蕓薹生鏈格孢基因組RNA的提取
        2.2.4 cDNA的合成
        2.2.5 突變體基因突變位點(diǎn)的確定
        2.2.6 hiTAIL-PCR技術(shù)擴(kuò)增側(cè)翼序列
        2.2.7 Abblr基因的克隆及序列分析
        2.2.8 Abblr基因打靶載體的構(gòu)建
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化
        2.2.10 質(zhì)粒提取
        2.2.11 重組DNA片段的大量擴(kuò)增及濃縮
        2.2.12 原生質(zhì)體的制備
        2.2.13 原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化
        2.2.14 Abblr基因缺失突變體的篩選與驗(yàn)證
        2.2.15 回補(bǔ)體的構(gòu)建與驗(yàn)證
        2.2.16 Abblr基因缺失突變體致病機(jī)理功能研究
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 蕓薹生鏈格孢致病缺陷突變體的篩選
    3.2 蕓薹生鏈格孢致病缺陷突變體基因突變位點(diǎn)的確定
    3.3 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的克隆及生物學(xué)分析
        3.3.1 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的克隆
        3.3.2 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的生物學(xué)分析
    3.4 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的敲除
    3.5 蕓薹生鏈格孢Abblr基因缺失突變體的篩選驗(yàn)證
        3.5.1 PCR篩選驗(yàn)證
        3.5.2 Southern雜交驗(yàn)證
    3.6 蕓薹生鏈格孢回補(bǔ)體的構(gòu)建與篩選驗(yàn)證
    3.7 Abblr基因缺失突變體的相關(guān)功能研究
        3.7.1 Abblr基因缺失突變體菌落形態(tài)的觀(guān)察
        3.7.2 Abblr基因缺失突變體菌落生長(zhǎng)速度的測(cè)定
        3.7.3 Abblr基因缺失突變體的菌絲及孢子形態(tài)觀(guān)察
        3.7.4 Abblr基因缺失突變體的致病力測(cè)定
        3.7.5 Abblr基因缺失突變體玻璃紙穿透能力的測(cè)定
        3.7.6 Abblr基因缺失突變體H2O2 降解能力的測(cè)定
        3.7.7 Abblr基因缺失突變體光修復(fù)能力的測(cè)定
        3.7.8 Abblr基因缺失突變體產(chǎn)類(lèi)胡蘿卜素能力的測(cè)定
        3.7.9 Abblr基因缺失突變體誘導(dǎo)分生孢子的測(cè)定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4019333