蕓薹生鏈格孢（Alternaria brassicicola）是十字花科蔬菜的一個重要致病真菌,其侵染引起的黑斑病會導(dǎo)致十字花科蔬菜產(chǎn)、質(zhì)量嚴(yán)重下降。對該病原菌致病機理的深入研究有助于黑斑病的防治。藍(lán)光對病原菌的生長發(fā)育、有性生殖及無性生殖、體內(nèi)的新陳代謝、產(chǎn)孢以及致病力等方面均能起到重要調(diào)控作用。因此,本研究從致病缺陷突變體AbS4b入手,明確其突變基因為藍(lán)光調(diào)節(jié)蛋白基因Abblr,進一步對該基因的功能進行了研究,結(jié)果如下:（1）利用離體葉片接種法對蕓薹生鏈格孢轉(zhuǎn)化子庫進行致病缺陷突變體的篩選,共得到5株致病能力顯著下降的突變體,其中致病能力完全喪失的有2株,分別是AbM1a和AbS4b;致病能力明顯下降的有3株,分別為AbF7a、AbS2b、AbS3b。利用hiTAIL-PCR技術(shù)成功擴增到了突變體AbS4b的質(zhì)粒插入基因為藍(lán)光調(diào)節(jié)蛋白基因,將其命名為Abblr（Alternaria brassicicola blue light regulator）。（2）Abblr基因全長1432 bp,含有一個52 bp的內(nèi)含子,編碼459個氨基酸,包含一個PAS結(jié)構(gòu)域和一個ZnF_G...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 蕓薹生鏈格孢與黑斑病
    1.2 蕓薹生鏈格孢菌的致病機制
    1.3 藍(lán)光受體蛋白概述
        1.3.1 真菌與藍(lán)光響應(yīng)
        1.3.2 White Collar系同源物(WC)
        1.3.3 藍(lán)光受體相關(guān)基因的功能研究
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 供試菌株與培養(yǎng)條件
        2.1.2 質(zhì)粒載體
        2.1.3 主要試驗試劑
        2.1.4 主要溶劑及培養(yǎng)基的配制
        2.1.5 主要試驗儀器
        2.1.6 PCR引物序列
    2.2 試驗方法
        2.2.1 突變體的篩選
        2.2.2 CTAB法提取全基因組DNA
        2.2.3 蕓薹生鏈格孢基因組RNA的提取
        2.2.4 cDNA的合成
        2.2.5 突變體基因突變位點的確定
        2.2.6 hiTAIL-PCR技術(shù)擴增側(cè)翼序列
        2.2.7 Abblr基因的克隆及序列分析
        2.2.8 Abblr基因打靶載體的構(gòu)建
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化
        2.2.10 質(zhì)粒提取
        2.2.11 重組DNA片段的大量擴增及濃縮
        2.2.12 原生質(zhì)體的制備
        2.2.13 原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化
        2.2.14 Abblr基因缺失突變體的篩選與驗證
        2.2.15 回補體的構(gòu)建與驗證
        2.2.16 Abblr基因缺失突變體致病機理功能研究
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 蕓薹生鏈格孢致病缺陷突變體的篩選
    3.2 蕓薹生鏈格孢致病缺陷突變體基因突變位點的確定
    3.3 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的克隆及生物學(xué)分析
        3.3.1 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的克隆
        3.3.2 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的生物學(xué)分析
    3.4 蕓薹生鏈格孢Abblr基因的敲除
    3.5 蕓薹生鏈格孢Abblr基因缺失突變體的篩選驗證
        3.5.1 PCR篩選驗證
        3.5.2 Southern雜交驗證
    3.6 蕓薹生鏈格孢回補體的構(gòu)建與篩選驗證
    3.7 Abblr基因缺失突變體的相關(guān)功能研究
        3.7.1 Abblr基因缺失突變體菌落形態(tài)的觀察
        3.7.2 Abblr基因缺失突變體菌落生長速度的測定
        3.7.3 Abblr基因缺失突變體的菌絲及孢子形態(tài)觀察
        3.7.4 Abblr基因缺失突變體的致病力測定
        3.7.5 Abblr基因缺失突變體玻璃紙穿透能力的測定
        3.7.6 Abblr基因缺失突變體H2O2 降解能力的測定
        3.7.7 Abblr基因缺失突變體光修復(fù)能力的測定
        3.7.8 Abblr基因缺失突變體產(chǎn)類胡蘿卜素能力的測定
        3.7.9 Abblr基因缺失突變體誘導(dǎo)分生孢子的測定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：4019333