小麥?zhǔn)鞘澜缛蠹Z食作物之一,小麥赤霉病(Fusarium head blight)是影響小麥產(chǎn)量和質(zhì)量的重要病害。小麥赤霉菌(Fusarium graminearum)是引起小麥赤霉病的主要病原菌,小麥赤霉菌產(chǎn)生的真菌毒素對農(nóng)作物和人畜均有嚴(yán)重危害。目前小麥赤霉菌的基因組測序已完成,這對于研究小麥赤霉病相關(guān)基因的致病機(jī)理至關(guān)重要。將小麥赤霉菌MGV1基因敲除后,對其敲除突變體做了轉(zhuǎn)錄組測序,與野生型小麥赤霉菌菌株P(guān)H-1對比后發(fā)現(xiàn)有差異基因的表達(dá),共有2062個下調(diào)基因,1729個上調(diào)基因。通過基因差異表達(dá)結(jié)果分析,FGSG₀7235基因在MGV1基因缺失后表達(dá)量顯著上調(diào)。GO注釋預(yù)測該基因是異三聚體G蛋白復(fù)合物,具有水解酶活性,可在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)。因此,推測FGSG₀7235基因是受MGV1基因調(diào)控的上游基因,在MGV1通路中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)選擇FGSG₀7235基因作為研究對象,應(yīng)用基因取代技術(shù)對其表型和功能進(jìn)行初步研究。本實(shí)驗(yàn)使用Split-Marker基因敲除技術(shù),成功構(gòu)建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
1 緒論
    1.1 前言
    1.2 小麥赤霉菌的生物學(xué)特征
    1.3 小麥赤霉病病害及防治方法
    1.4 小麥赤霉菌毒素
    1.5 小麥赤霉菌功能基因組學(xué)的研究
    1.6 FGSG₀7235基因研究背景
    1.7 本研究的目的和意義
2 小麥赤霉菌FGSG₀7235基因缺失盒的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        2.1.1 材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 野生型菌株P(guān)H-1基因組DNA的提取
        2.2.2 質(zhì)粒pCB1003DNA的提取
        2.2.3 FGSG₀7235基因敲除盒的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 野生型菌株P(guān)H-1基因組DNA的提取
        2.3.2 pCB1003質(zhì)粒DNA的提取
        2.3.3 PCR擴(kuò)增FGSG₀7235基因上下游序列
        2.3.4 PCR擴(kuò)增hph基因上下游序列
        2.3.5 PCR擴(kuò)增Splitmarker重疊序列
    2.4 討論
3 FGSG₀7235基因的敲除及轉(zhuǎn)化子的篩選鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑
        3.1.3 儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 原生質(zhì)體的制備與轉(zhuǎn)化
        3.2.2 轉(zhuǎn)化子的篩選和鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 轉(zhuǎn)化子DNA的提取
        3.3.2 轉(zhuǎn)化子的PCR正負(fù)篩選
    3.4 討論
4 FGSG₀7235基因缺失突變體的表型觀察及致病力檢測
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 菌落形態(tài)的觀察
        4.2.2 菌落生長速度的測定
        4.2.3 有性雜交實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 不同菌株培養(yǎng)液顏色的比較
        4.2.5 菌株對溫度敏感性測定
        4.2.6 分生孢子形態(tài)觀察
        4.2.7 產(chǎn)孢量的測定
        4.2.8 侵染番茄實(shí)驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 菌落形態(tài)的觀察
        4.3.2 菌落生長速度的測定
        4.3.3 有性雜交實(shí)驗(yàn)
        4.3.4 不同菌株培養(yǎng)液顏色的比較
        4.3.5 菌株對溫度敏感性測定
        4.3.6 分生孢子形態(tài)觀察
        4.3.7 產(chǎn)孢量的測定
        4.3.8 侵染番茄實(shí)驗(yàn)
    4.4 討論
5 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3988837