通過CRISPR/Cas系統(tǒng)來構(gòu)建miR-17-92基因簇的雙切載體,研究結(jié)果表明:在miR-17-92基因簇的序列上找到了2個(gè)PAM(TGG和GGG)位點(diǎn),從而得到了2個(gè)原間隔序列,設(shè)計(jì)合成基因簇雙鏈crRNA;合成該片段并將其插入到p X260載體,使得在同一個(gè)載體上雖然只有一個(gè)g-RNA,但能夠同時(shí)切割兩個(gè)不同的靶位點(diǎn);將該載體轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞驗(yàn)證切割效率,PCR結(jié)果和測(cè)序結(jié)果顯示,所構(gòu)建的CRISPR系統(tǒng)可以對(duì)基因片段進(jìn)行有效切割。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1 crRNA序列的設(shè)計(jì)
    1.2質(zhì)粒載體的構(gòu)建
    1.3 miR-17-92基因簇雙切載體切割效率檢測(cè)
2結(jié)果與分析
    2.1 crRNA序列的設(shè)計(jì)
    2.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)miR-17-92基因簇雙切載體的構(gòu)建
    2.3 miR-17-92基因簇雙切載體的檢測(cè)
        2.3.1 PCR檢測(cè)
        2.3.2灰度分析切割效率
        2.3.3測(cè)序分析
3結(jié)論與討論



本文編號(hào)：3961957