脂肪酶是一種特殊的甘油三酯水解酶,其作用條件溫和、副產(chǎn)物少、可作用于油-水界面催化甘油酯水解成脂肪酸和甘油,還能催化水解、酯交換、酯化、醇解、酸解和氨解多種反應。低溫脂肪酶是指在0oC仍具有一定催化活性、最適溫度不超過30oC的脂肪酶,大多數(shù)在高溫條件下酶活力較差。低溫脂肪酶還具有一定有機溶劑耐受性、偏好C3^C10長鏈的脂肪酸酯以及具有更寬泛的pH適用范圍,因此低溫脂肪酶在水產(chǎn)飼料、食品、生物醫(yī)藥、皮革、環(huán)境治理、生物柴油、洗滌等行業(yè)有較大的應用前景。據(jù)報道,假單胞菌屬(Pseudomonas)和氣單胞菌屬(Aeromonas)是低溫脂肪酶的主要來源。為了拓寬低溫脂肪酶的基因資源,本論文從微生物中克隆、表達三個脂肪酶基因,獲得的重組蛋白分別命名為PgLip、PfLip和BcLip,分別來源于谷關(guān)假單胞菌(Pseudomonas guguanensis)、臺灣假單胞菌(Pseudomonas formosensis)和枯草芽孢桿菌(Bacillus clausii)。酶學性質(zhì)測定表明,PgLip、PfLip和BcLip最適溫度均在20oC以下,在0oC仍具有較高的酶...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 脂肪酶概述
        1.1.1 脂肪酶來源
        1.1.2 脂肪酶分類與分子結(jié)構(gòu)
        1.1.3 脂肪酶性質(zhì)
        1.1.4 脂肪酶的應用
    1.2 低溫脂肪酶
        1.2.1 低溫脂肪酶的特征
        1.2.2 低溫脂肪酶的研究意義
        1.2.3 低溫脂肪酶的應用前景
    1.3 宏基因組學
        1.3.1 基因的獲得
        1.3.2 宏基因組文庫的構(gòu)建
        1.3.3 宏基因組文庫的篩選
    1.4 生物傳感器
    1.5 研究意義
第二章 低溫脂肪酶基因的克隆、表達和生化表征
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株、載體、質(zhì)粒、試劑、培養(yǎng)基和實驗儀器
        2.1.2 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 克勞氏芽孢桿菌基因組DNA的提取
        2.2.2 脂肪酶基因的獲取
        2.2.3 表達載體的構(gòu)建
        2.2.4 脂肪酶基因的重組表達
        2.2.5 重組脂肪酶的純化
        2.2.6 蛋白濃度測定
        2.2.7 脂肪酶的酶學性質(zhì)
        2.2.8 脂肪酶的生化表征
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 假單胞菌的分析
        2.3.2 BcLip基因的克隆、表達和生化表征
        2.3.3 PfLip的克隆、表達和生化表征
        2.3.4 PgLip的克隆、表達和生化表征
    2.4 討論
第三章 高通量篩選脂肪酶基因方法的初步建立
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株、載體、試劑、儀器及培養(yǎng)基
        3.1.2 本章所有引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 fadE基因的敲除
        3.2.2 針對脂肪酶高通量篩選系統(tǒng)的構(gòu)建
        3.2.3 針對脂肪酶高通量篩選系統(tǒng)的驗證
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 fadE基因的敲除
    3.4 討論
第四章 脂肪酶高通量篩選方法的初步應用
    4.1 實驗材料
        4.1.1 菌株、載體、試劑、儀器及培養(yǎng)基
        4.1.2 引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 土壤宏基因組的構(gòu)建
        4.2.2 高通量篩選土壤宏基因組文庫
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 土壤微生物宏基因組DNA的提取
        4.3.2 土壤宏基因組DNA酶切效果比較
        4.3.3 土壤宏基因組的酶切和回收
        4.3.4 用于構(gòu)建土壤文庫p AR-Ds Red-Amp載體質(zhì)粒
        4.3.5 連接、轉(zhuǎn)化以構(gòu)建土壤宏基因組文庫
        4.3.6 高通量篩選土壤宏基因組文庫
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3958152