【目的】絲氨酸蛋白酶抑制劑家族蛋白是昆蟲中調(diào)控自身免疫反應(yīng)的重要蛋白酶抑制劑,本研究旨在研究家蠶Bombyx mori絲氨酸蛋白酶抑制劑2(Bmserpin2)在家蠶2個(gè)重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase, PPO)激活通路和革蘭氏陽(yáng)性菌誘導(dǎo)抗菌肽的TOLL通路中的調(diào)控作用。【方法】PCR擴(kuò)增家蠶Bmserpin2基因片段后原核表達(dá)并通過(guò)鎳柱純化。利用純化后的重組Bmserpin2蛋白分別與胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶和蛋白酶K反應(yīng),檢測(cè)Bmserpin2對(duì)上述蛋白酶活性的影響。通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)Bmserpin2在家蠶5齡第3天幼蟲頭、中腸、脂肪體、血淋巴、絲腺和表皮組織中表達(dá)的模式。往家蠶5齡第3天幼蟲注射Bmserpin2重組蛋白,檢測(cè)Bmserpin2對(duì)其血淋巴中PPO活性的影響。通過(guò)滕黃微球菌Micrococcus luteus誘導(dǎo)家蠶5齡第3天幼蟲產(chǎn)生抗菌肽并注射Bmserpin2重組蛋白后,RT-qPCR檢測(cè)其血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin表達(dá)量�！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建重組質(zhì)粒并表達(dá)純化目的蛋白Bmserpin2。...

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【部分圖文】：

圖1原核表達(dá)與純化重組蛋白Bmserpin2的SDS-PAGE檢測(cè)(A)及Westernblot分析(B)

結(jié)果如圖5所示,注射滕黃微球菌和PBS的陽(yáng)性對(duì)照組較空白對(duì)照組抗菌肽基因gloverin2和moricin表達(dá)上調(diào),而注射滕黃微球菌和Bmserpin2混合物的實(shí)驗(yàn)組中g(shù)loverin2(圖5:A)和moricin(圖5:B)的mRNA水平顯著性下調(diào)(P<0.05)。這一結(jié)果....

圖2家蠶重組蛋白Bmserpin2對(duì)胰蛋白酶(A)、胰凝乳蛋白酶(B)、彈性蛋白酶(C)和蛋白酶K(D)活性的影響

圖1原核表達(dá)與純化重組蛋白Bmserpin2的SDS-PAGE檢測(cè)(A)及Westernblot分析(B)圖3RT-qPCR檢測(cè)Bmserpin2在家蠶5齡幼蟲不同組織中的相對(duì)表達(dá)量

圖3RT-qPCR檢測(cè)Bmserpin2在家蠶5齡幼蟲不同組織中的相對(duì)表達(dá)量

圖2家蠶重組蛋白Bmserpin2對(duì)胰蛋白酶(A)、胰凝乳蛋白酶(B)、彈性蛋白酶(C)和蛋白酶K(D)活性的影響圖4重組蛋白Bmserpin2對(duì)家蠶5齡幼蟲血淋巴中酚氧化酶原活性的影響

圖4重組蛋白Bmserpin2對(duì)家蠶5齡幼蟲血淋巴中酚氧化酶原活性的影響

圖3RT-qPCR檢測(cè)Bmserpin2在家蠶5齡幼蟲不同組織中的相對(duì)表達(dá)量圖5RT-qPCR檢測(cè)Bmserpin2蛋白對(duì)家蠶5齡幼蟲血淋巴中抗菌肽基因gloverin2(A)和moricin(B)表達(dá)的影響

本文編號(hào)：3957051