黃瓜霜霉病是瓜類蔬菜生產中最具有毀滅性的世界性病害,造成了非常嚴重的損失,嚴重影響黃瓜的產量。因此,抗性基因的發(fā)掘和抗病機制的深入研究對黃瓜抗霜霉病的育種和生產實踐具有重要意義。本文通過霜霉病的誘導及轉錄組數(shù)據(jù)分析,挖掘出了差異表達基因CsWRKY50。研究了該基因對黃瓜霜霉病的防御反應機理,以期豐富黃瓜霜霉病抗性機制的理論基礎。主要研究結果如下:通過霜霉病菌誘導和轉錄組數(shù)據(jù)分析,鑒定出一個差異表達基因,經進化樹和基因序列比對分析,明確了該基因結構及其他物種相關基因的親緣關系。發(fā)現(xiàn)它和擬南芥的AtWRKY50同源性較高,命名該基因為CsWRKY50;亞細胞定位試驗表明,該基因編碼核定位蛋白。通過時空表達分析發(fā)現(xiàn),該基因在雌花、葉、根中的表達量較高。實時熒光定量PCR技術檢測顯示,CsWRKY50的表達受逆境脅迫的誘導,干旱誘導下3h表達量開始升高,6 h達到最高;鹽誘導下6 h表達量開始上升,12 h達到最高。其它激素MeJA、SA、ABA、BR處理下,1 h開始表達,后期表達都有相應的變化。結果表明CsWRKY50可能在黃瓜脅迫響應中發(fā)揮著重要的作用。對該基因進行黃瓜遺傳轉化,結果表...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1黃瓜WRKI-like基因編碼蛋白質參與植物病原菌互作代謝通路Fig.lCucumberencodingARKY-likeproteinsinvolvedinplant-pathogeninteractionmetabolicpathway

3結果與分析3.1WRKY-like基因的獲得與分析圖1中顯示：鈣調蛋白激酶（CDPK）、氧化酶的同源基因（Rboh）、WRKY、MKK、PR1、JAZ、MYC2蛋白參與真菌PAMP、Ca2+、水楊酸、茉莉酸等信號的誘導和傳遞，這些基因的表達增強了黃瓜病原菌的識別系....

圖2CaWRKIS0的基因結構和氨基酸多序列比對分析

黃瓜CsWRKY50基因的克隆與功能研究站和生物軟件對該基因進行了比較系統(tǒng)的生物信息學分析。因結構和序列分析用NCBI數(shù)據(jù)庫和黃瓜基因組網(wǎng)站，分析發(fā)現(xiàn)Csa6M363560.1的全，含有462bp的開放閱讀框，13bp的5'非翻譯區(qū)（UTR）和106R。這....

圖3CsA72KY50蛋白與其它WRKY蛋白的進化關系分析

黃瓜CsWRKY50基因的克隆與功能研究煙草NtWRKY50。擬南芥中的這兩個基因已被研究，它們參與丁香假單胞菌的介導防御，沉默該基因后，增強了植株對病害的敏感程度（Gaoetal.，2011）。據(jù)說這個亞族含有很多WRKYGQK七肽序列，這序列與本研究的結果一致（圖....

圖5CsWRKY50基因擴增產物（A）與酶切驗證（B）M：DNA分子量標記DL2501Fig.5CsWRKY50geneamplification(A)andrestrictionenzyme(B)M:DNAMarkerDL2501

sWRKY50蛋白的亞細胞定位用PredictProtein（Rostetal.，2004）軟件對CsWRKY50蛋白的亞細胞預測，預測結果說明該蛋白在細胞核中的概率為95.7%。為了驗Y50蛋白亞細胞定位的預測結果，構建了35S:CsWRKY50-GFP的融體....

本文編號：3946160