背景:德朗熱綜合征(Cornelia de Lange Syndrome,CdLS)是全身多種器官不同程度受累及的罕見(jiàn)遺傳性疾病,其主要臨床特征包括:智力障礙、特征性面容、上肢及脊柱畸形、多毛癥等多種癥狀。目前已發(fā)現(xiàn)有7個(gè)基因(NIPBL、SMC1A、RAD21、BRD4、HDAC8、SMC3、ANKRD11)的突變參與CdLS的發(fā)生,約占70%CdLS患者檢測(cè)出NIPBL基因發(fā)生突變。目的:觀察NIPBL基因在細(xì)胞水平對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化能力產(chǎn)生的影響。方法:采用NIPBL-Loxp小鼠與Cre小鼠構(gòu)建NIPBL基因缺陷雜合子小鼠模型(NIPBL^+/-)并將其作為實(shí)驗(yàn)組,野生型(NIPBL^+/+)小鼠作為對(duì)照組。全骨髓貼壁法分離兩組小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)到第3天倒置顯微鏡下對(duì)其細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察。為了鑒定細(xì)胞類(lèi)型,細(xì)胞傳至第3代時(shí)采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原表達(dá)。用CCK-8法對(duì)兩組細(xì)胞增殖能力進(jìn)行測(cè)定并比較,然后將細(xì)胞培養(yǎng)基更換為成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng),用RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)Runx2、OCN...

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖4實(shí)驗(yàn)組NIPBL+/-小鼠和對(duì)照組NIPBL+/+小鼠第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

敲除NIPBL基因可下調(diào)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化能力15相較于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖能力在前5天差異不大，在第6天以后對(duì)照組細(xì)胞增殖能力提高顯著，而實(shí)驗(yàn)組提高則相對(duì)緩慢，見(jiàn)圖4。在傳代之后，兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線是基本一致，都“S”形態(tài)曲線。傳代的前5天，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度非....

圖6比較實(shí)驗(yàn)組NIPBL+/-小鼠和對(duì)照組NIPBL+/+小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后堿性磷酸酶活性

圖注：圖A為對(duì)照組NIPBL+/+小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)7d；圖B為實(shí)驗(yàn)組NIPBL+/-小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)7d；圖C為對(duì)照組NIPBL+/+小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)14d；圖D為實(shí)驗(yàn)組NIPBL+/....

圖7實(shí)驗(yàn)組NIPBL+/-小鼠和對(duì)照組NIPBL+/+小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后成骨相關(guān)基因表達(dá)

敲除NIPBL基因可下調(diào)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化能力17Fig.6Comparisonofalkalinephosphataseactivityofbonemarrowmesenchymalstemcellsafterosteogenicinductionintheex....

圖10a:NIPBL+/+;b:NIPBL+/-;c:NIPBL+/-+LiCL此外，神經(jīng)系統(tǒng)異常也是CdLS的另一大顯著特征，精準(zhǔn)的研究CdLS患者的行為對(duì)其神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常的機(jī)制闡明是也很重要的

??淙淮蟛糠侄?比野生型小鼠提取的細(xì)胞狀態(tài)差，但也有約10%細(xì)胞出現(xiàn)基本無(wú)法生長(zhǎng)的狀況，這里或許對(duì)應(yīng)著不同CdLS疾病患者癥狀的差異巨大。本實(shí)驗(yàn)后期，為了探索是否有藥物能逆轉(zhuǎn)NIPBL基因敲除降低的細(xì)胞增殖及成骨分化能力，本文作者嘗試0.01ug/ml鋰鹽（氯化鋰）加入NIPBL....

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