發(fā)布時(shí)間：2024-03-24 02:37

　　以野生型蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus) EN34為出發(fā)菌株,增強(qiáng)胱硫醚γ-合成酶基因(metI)表達(dá),敲除或弱化腺苷蛋氨酸合成酶的編碼基因metK,分析這2個(gè)基因的改變對(duì)蛋氨酸產(chǎn)量的影響。從枯草芽孢桿菌基因組中擴(kuò)增P43強(qiáng)啟動(dòng)子,連接到pEB03質(zhì)粒,利用重組連接的方法,將metI從Bacillus cereus EN34擴(kuò)增重組連接到質(zhì)粒,構(gòu)建成pEB03-P43-SD-metI,通過電擊轉(zhuǎn)化到Bacillus cereus EN34,獲得Bacillus cereusEN34(pEB03-P43-SD-metI)菌株。通過Bacillus cereus EN34擴(kuò)增metK基因,提取質(zhì)粒pKVM1以及重組連接等方法,構(gòu)建出pKVM 1::metK′敲除質(zhì)粒,將質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到Bacillus cereusEN34中進(jìn)行metK交換,再篩選出單交換成功的菌株,最后獲得metK弱化成功Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株。經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)基硫源優(yōu)化分析得出,單獨(dú)增強(qiáng)metI表達(dá)不能提高蛋氨酸產(chǎn)量,產(chǎn)量與出發(fā)菌株基本一致;改變metK基因,能提高蛋氨酸產(chǎn)量,但...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑和儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 PCR引物設(shè)計(jì)
    1.3 metI基因加強(qiáng)表達(dá)
    1.4 metK基因敲除
    1.5 蛋氨酸產(chǎn)量分析
    1.6 優(yōu)化培養(yǎng)基成分
2 結(jié)果與分析
    2.1 質(zhì)粒pEB03-P43-SD-metI構(gòu)建
    2.2 電擊轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pEB03-P43-SD-metI
    2.3 構(gòu)建質(zhì)粒pKVM1::metK′
    2.4 改變Bacillus cereus EN34 metK基因
    2.5 蛋氨酸產(chǎn)量分析
    2.6 培養(yǎng)條件優(yōu)化
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3936839