【目的】辣椒脈斑駁病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生產(chǎn)上危害嚴(yán)重的病毒,也是口岸檢疫的重要病毒之一。本文旨在建立一種快速檢測(cè)ChiVMV的多基因聯(lián)合檢測(cè)方法,實(shí)現(xiàn)ChiVMV的快速、準(zhǔn)確鑒定�！痉椒ā坷肈AS-ELISA、RT-PCR方法對(duì)印度進(jìn)境辣椒進(jìn)行檢測(cè)以確定是否攜帶有ChiVMV。根據(jù)ChiVMV外殼蛋白(coat protein,CP)和圓柱狀內(nèi)含體蛋白(cytoplasmic inclusion protein,CI)保守區(qū)域分別設(shè)計(jì)引物,篩選兩個(gè)基因(CP和CI)的特異性引物組合,通過(guò)設(shè)定不同的引物用量組合以及對(duì)退火溫度等條件進(jìn)行優(yōu)化,探索最佳的反應(yīng)條件,建立多基因聯(lián)合檢測(cè)方法。利用建立的多基因聯(lián)合檢測(cè)體系對(duì)包含ChiVMV在內(nèi)的辣椒病毒進(jìn)行檢測(cè),以驗(yàn)證該體系特異性。同時(shí)對(duì)ChiVMV陽(yáng)性樣品的不同濃度cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,測(cè)定其檢測(cè)靈敏度。此外,對(duì)田間辣椒樣本進(jìn)行檢測(cè),以驗(yàn)證體系的實(shí)際應(yīng)用效果�！窘Y(jié)果】通過(guò)對(duì)印度進(jìn)境辣椒的DAS-ELISA檢測(cè),發(fā)現(xiàn)樣品提取液與ChiVMV呈陽(yáng)性反應(yīng);利用CP861-F/CP861-R特異性...

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

圖1印度進(jìn)境辣椒常規(guī)RT-PCR擴(kuò)增

利用CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R兩對(duì)引物分別進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增及多基因聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果顯示多基因聯(lián)合檢測(cè)體系擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的CP及CI兩個(gè)片段，大小分別約為337和655bp，與兩個(gè)基因單獨(dú)擴(kuò)增效果一致，且無(wú)非特異性擴(kuò)增（圖2）。不同退火....

圖2多基因聯(lián)合檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

圖1印度進(jìn)境辣椒常規(guī)RT-PCR擴(kuò)增圖3多基因聯(lián)合檢測(cè)體系退火溫度的優(yōu)化

圖3多基因聯(lián)合檢測(cè)體系退火溫度的優(yōu)化

圖2多基因聯(lián)合檢測(cè)RT-PCR結(jié)果2.3多基因聯(lián)合檢測(cè)的特異性

圖4多基因聯(lián)合檢測(cè)體系引物用量的優(yōu)化

經(jīng)優(yōu)化之后的多基因聯(lián)合檢測(cè)體系能夠從ChiVMV上同時(shí)擴(kuò)增出CP及CI的目的片段，且未出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，而其他辣椒主要病毒均未擴(kuò)增出相應(yīng)的條帶（圖5）；同時(shí)，兩個(gè)基因片段的PCR產(chǎn)物經(jīng)回收純化后進(jìn)行克隆測(cè)序，所測(cè)的序列與已報(bào)道的ChiVMV序列一致性均高達(dá)98%以上，表明所擴(kuò)增出....

本文編號(hào)：3934377