發(fā)布時間：2024-03-22 00:44

　　【目的】辣椒脈斑駁病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生產(chǎn)上危害嚴重的病毒,也是口岸檢疫的重要病毒之一。本文旨在建立一種快速檢測ChiVMV的多基因聯(lián)合檢測方法,實現(xiàn)ChiVMV的快速、準確鑒定�！痉椒ā坷肈AS-ELISA、RT-PCR方法對印度進境辣椒進行檢測以確定是否攜帶有ChiVMV。根據(jù)ChiVMV外殼蛋白(coat protein,CP)和圓柱狀內(nèi)含體蛋白(cytoplasmic inclusion protein,CI)保守區(qū)域分別設(shè)計引物,篩選兩個基因(CP和CI)的特異性引物組合,通過設(shè)定不同的引物用量組合以及對退火溫度等條件進行優(yōu)化,探索最佳的反應條件,建立多基因聯(lián)合檢測方法。利用建立的多基因聯(lián)合檢測體系對包含ChiVMV在內(nèi)的辣椒病毒進行檢測,以驗證該體系特異性。同時對ChiVMV陽性樣品的不同濃度cDNA進行擴增,測定其檢測靈敏度。此外,對田間辣椒樣本進行檢測,以驗證體系的實際應用效果�！窘Y(jié)果】通過對印度進境辣椒的DAS-ELISA檢測,發(fā)現(xiàn)樣品提取液與ChiVMV呈陽性反應;利用CP861-F/CP861-R特異性...

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

圖1印度進境辣椒常規(guī)RT-PCR擴增

利用CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R兩對引物分別進行RT-PCR擴增及多基因聯(lián)合檢測，結(jié)果顯示多基因聯(lián)合檢測體系擴增出與預期大小一致的CP及CI兩個片段，大小分別約為337和655bp，與兩個基因單獨擴增效果一致，且無非特異性擴增（圖2）。不同退火....

圖2多基因聯(lián)合檢測RT-PCR結(jié)果

圖1印度進境辣椒常規(guī)RT-PCR擴增圖3多基因聯(lián)合檢測體系退火溫度的優(yōu)化

圖3多基因聯(lián)合檢測體系退火溫度的優(yōu)化

圖2多基因聯(lián)合檢測RT-PCR結(jié)果2.3多基因聯(lián)合檢測的特異性

圖4多基因聯(lián)合檢測體系引物用量的優(yōu)化

經(jīng)優(yōu)化之后的多基因聯(lián)合檢測體系能夠從ChiVMV上同時擴增出CP及CI的目的片段，且未出現(xiàn)非特異性擴增，而其他辣椒主要病毒均未擴增出相應的條帶（圖5）；同時，兩個基因片段的PCR產(chǎn)物經(jīng)回收純化后進行克隆測序，所測的序列與已報道的ChiVMV序列一致性均高達98%以上，表明所擴增出....

本文編號：3934377