目的:研究抑制JWA基因的表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制。方法:用TGF-β1轉(zhuǎn)染JWA RNA處理體外培養(yǎng)大鼠心肌H9c2心肌細(xì)胞,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈技術(shù)(RT-PCR)和Western blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞中JWA的表達(dá)水平的變化,采用噻唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)心肌細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況,對(duì)比檢測(cè)心肌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白、Bcl-2相關(guān)X (Bax)蛋白和Bcl-2蛋白水平,檢測(cè)心肌細(xì)胞中產(chǎn)生的活性氧(ROS)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果:TGF-β1處理后的心肌細(xì)胞中JWA mRNA水平和Bcl-2蛋白水平、CAT、GSH-PX含量均明顯高于正常培養(yǎng)的心肌細(xì)胞,細(xì)胞存活率升高,細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平、Bax/Bcl-2值、細(xì)胞中ROS、MDA含量均降低(P<0.05),與正常培養(yǎng)的心肌細(xì)胞相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:抑制JWA的表...

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圖1Westernblot檢測(cè)TGF-β1

TGF-β1組心肌細(xì)胞中JWAmRNA和蛋白水平明顯高于Control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。心肌細(xì)胞經(jīng)TGF-β1處理后,細(xì)胞中JWA轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平升高。見(jiàn)圖1和表1。表1TGF-β1處理后心肌細(xì)胞JWAmRNA和蛋白水平比較(xˉ±s)組別....

圖2Westernblot測(cè)定轉(zhuǎn)染后心肌細(xì)胞中JWA蛋白表達(dá)

與Control組相比,si-JWA組心肌細(xì)胞中JWAmRNA和蛋白水平及增殖活性明顯降低,凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Control組相比,si-Con組心肌細(xì)胞中JWA表達(dá)水平、細(xì)胞增殖活性和凋亡率沒(méi)有明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。轉(zhuǎn)....

圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡水平

與Control組相比,TGF-β1組、si-Con+TGF-β1組、si-JWA+TGF-β1組心肌細(xì)胞存活率明顯降低,凋亡率明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與TGF-β1組相比,si-JWA+TGF-β1組細(xì)胞存活率明顯升高,凋亡率明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(....

圖4Westernblot檢測(cè)各組心肌細(xì)胞中CleavedCaspase-3、Bax和Bcl-2的表達(dá)水平

與Control組相比,TGF-β1組心肌細(xì)胞中CleavedCaspase-3、Bax蛋白水平明顯升高,Bcl-2蛋白水平明顯降低,Bax/Bcl-2值升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與TGF-β1組相比,si-JWA+TGF-β1組心肌細(xì)胞中CleavedC....

本文編號(hào)：3921523