綠僵菌(Metarhizium spp.)是一類重要的昆蟲(chóng)病原真菌,由于其安全、對(duì)環(huán)境友好等特性而被廣泛研究。其中,蝗綠僵菌(Metarhizium acridum)是一種特異侵染蝗蟲(chóng)的昆蟲(chóng)病原真菌,是研究一系列關(guān)于生態(tài)學(xué)、進(jìn)化論及物種形成機(jī)制等問(wèn)題的模式生物,具有極大的生防潛力。目前,這類生物制劑已應(yīng)用于澳大利亞、非洲及亞洲等國(guó)家和地區(qū),然而其易受環(huán)境影響和功效差等缺點(diǎn)嚴(yán)重阻礙了它在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用。因此,在分子層面上研究昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)害蟲(chóng)的有效防治具有重要意義。在真核生物中,蛋白激酶和磷酸酶調(diào)控的磷酸化和去磷酸化作用起著十分重要的作用。在本研究中,我們研究了一個(gè)雙特異性磷酸酶基因MaCdc14。經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析,顯示該基因全長(zhǎng)1963 bp,含有一段103 bp的內(nèi)含子序列,可編碼含619個(gè)氨基酸的蛋白。該蛋白分子量為69.11 kDa,等電點(diǎn)為9.29,不含信號(hào)肽。通過(guò)同源比對(duì),發(fā)現(xiàn)該基因在真菌中高度保守。為了研究該基因在蝗綠僵菌中的功能,分別利用同源重組和隨機(jī)插入的方法構(gòu)建了MaCdc14的敲除菌株(ΔMaCdc14)及回復(fù)菌株(CP)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),MaCdc14缺失后分支數(shù)和菌絲...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1蝗綠僵菌中MaCdc14的特征

2蝗綠僵菌MaCdc14的功能研究31經(jīng)在線網(wǎng)站http://www.cbs.dtu.dk/services/signalP預(yù)測(cè)，該蛋白不含信號(hào)肽。通過(guò)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi），該蛋....

圖2.2在蝗綠僵菌中MaCdc14敲除與回復(fù)菌株的構(gòu)建（a）MaCdc14敲除與回復(fù)載體構(gòu)建的示意圖

重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文32理構(gòu)建了該基因的敲除及回復(fù)載體（圖2.2a）。分別設(shè)計(jì)該基因左、右臂引物L(fēng)F/LR和RF/RR，用PCR擴(kuò)增左右臂片段，并將其連接到pK2-PB載體上，并用左臂上游引物L(fēng)F（或載體上設(shè)計(jì)的引物VF）和在篩選標(biāo)記上設(shè)計(jì)的引物PR驗(yàn)證左臂是否成功連接，同樣，用....

圖2.3核分裂，隔的形成及菌絲分支數(shù)（a）用CFW對(duì)幾丁質(zhì)進(jìn)行染色，熒光顯微鏡觀察

2蝗綠僵菌MaCdc14的功能研究33失后都可以引起細(xì)胞分裂的異常，如釀酒酵母、球孢白僵菌、禾谷鐮刀菌和稻瘟病菌等[88,91-93]。因此，首先探究MaCdc14在蝗綠僵菌中是否也可以影響細(xì)胞分裂。圖2.3核分裂，隔的形成及菌絲分支數(shù)（a）用CFW對(duì)幾丁質(zhì)進(jìn)行染色，熒光顯微鏡觀....

圖2.4產(chǎn)孢過(guò)程及產(chǎn)孢量測(cè)定（a）各菌株在18h，26h和36h的菌絲形態(tài)

2蝗綠僵菌MaCdc14的功能研究35均上調(diào)表達(dá)。以上結(jié)果表明MaCdc14在產(chǎn)孢過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。圖2.4產(chǎn)孢過(guò)程及產(chǎn)孢量測(cè)定（a）各菌株在18h，26h和36h的菌絲形態(tài)。箭頭:產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)上的的分生孢子。Bar=10μm。（b）不同菌株在1/4SDAY培養(yǎng)3、5、7、....

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