cry1A基因編碼蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白,是轉(zhuǎn)基因植物使用最為廣泛的抗蟲基因,包括cry1Ab、cry1Ac、cry1A.105、cry1Ab/Ac等類型,cry1A基因為靶標的檢測方法在轉(zhuǎn)基因植物安全監(jiān)管與檢測中尤為重要。雖已建立數(shù)種cry1A基因檢測方法,但均因該基因間序列差別較大而無法覆蓋大部分轉(zhuǎn)化體。由此,采用簡并引物的策略,開發(fā)了一種cry1A基因通用檢測方法,檢測能力覆蓋了常見的16種含cry1A的轉(zhuǎn)化體,開發(fā)過程包括實驗室內(nèi)部方法建立和實驗室間循環(huán)驗證。結(jié)果表明,該方法在引物終濃度0.4μmol·L^-1,退火溫度64℃的條件下,能夠特異性檢測樣品中含有的cry1A基因,檢出限為0.1%。開發(fā)的cry1A基因檢測方法參數(shù)全面,重復(fù)性和重現(xiàn)性良好,為國內(nèi)外轉(zhuǎn)基因成分監(jiān)管與檢測提供方法參考。

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【部分圖文】：

圖1PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序優(yōu)化結(jié)果

特異性驗證結(jié)果(圖2)顯示,僅從含有cry1A基因的材料中獲得預(yù)期擴增產(chǎn)物,而從其他樣品中未獲得預(yù)期擴增產(chǎn)物,表明方法特異性符合要求。此外,上述不含cry1A基因的材料中包含了部分Bt基因的其他類別,實驗時均未獲得擴增,表明方法對cry1A基因特異性良好,可以用于cry1A基因的....

圖2引物特異性驗證

圖1PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序優(yōu)化結(jié)果2.4方法檢出限分析

圖3轉(zhuǎn)基因玉米Bt176對方法檢出限測試

歐盟標準物質(zhì)Bt11(0.098%)、MON810(<0.09%)Bt176(0.1%)均能穩(wěn)定檢出,對可檢出的最低質(zhì)量分數(shù)的測試樣品,60次重復(fù)實驗均有擴增條帶,確定方法的檢出限為0.1%(部分結(jié)果見圖3)。2.5實驗室間重復(fù)性分析

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