cry1A基因編碼蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白,是轉(zhuǎn)基因植物使用最為廣泛的抗蟲基因,包括cry1Ab、cry1Ac、cry1A.105、cry1Ab/Ac等類型,cry1A基因?yàn)榘袠?biāo)的檢測(cè)方法在轉(zhuǎn)基因植物安全監(jiān)管與檢測(cè)中尤為重要。雖已建立數(shù)種cry1A基因檢測(cè)方法,但均因該基因間序列差別較大而無法覆蓋大部分轉(zhuǎn)化體。由此,采用簡(jiǎn)并引物的策略,開發(fā)了一種cry1A基因通用檢測(cè)方法,檢測(cè)能力覆蓋了常見的16種含cry1A的轉(zhuǎn)化體,開發(fā)過程包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部方法建立和實(shí)驗(yàn)室間循環(huán)驗(yàn)證。結(jié)果表明,該方法在引物終濃度0.4μmol·L^-1,退火溫度64℃的條件下,能夠特異性檢測(cè)樣品中含有的cry1A基因,檢出限為0.1%。開發(fā)的cry1A基因檢測(cè)方法參數(shù)全面,重復(fù)性和重現(xiàn)性良好,為國(guó)內(nèi)外轉(zhuǎn)基因成分監(jiān)管與檢測(cè)提供方法參考。

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【部分圖文】：

圖1PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序優(yōu)化結(jié)果

特異性驗(yàn)證結(jié)果(圖2)顯示,僅從含有cry1A基因的材料中獲得預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物,而從其他樣品中未獲得預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物,表明方法特異性符合要求。此外,上述不含cry1A基因的材料中包含了部分Bt基因的其他類別,實(shí)驗(yàn)時(shí)均未獲得擴(kuò)增,表明方法對(duì)cry1A基因特異性良好,可以用于cry1A基因的....

圖2引物特異性驗(yàn)證

圖1PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序優(yōu)化結(jié)果2.4方法檢出限分析

圖3轉(zhuǎn)基因玉米Bt176對(duì)方法檢出限測(cè)試

歐盟標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Bt11(0.098%)、MON810(<0.09%)Bt176(0.1%)均能穩(wěn)定檢出,對(duì)可檢出的最低質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)試樣品,60次重復(fù)實(shí)驗(yàn)均有擴(kuò)增條帶,確定方法的檢出限為0.1%(部分結(jié)果見圖3)。2.5實(shí)驗(yàn)室間重復(fù)性分析

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