細粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)的幼蟲(細粒棘球蚴)寄生于人和多種動物的內臟器官所致的一種嚴重的人畜共患寄生蟲病被稱為細粒棘球蚴病。該病呈世界性分布,我國是高發(fā)地區(qū)之一,分布在國內23個省、市、自治區(qū),遍布全國368個縣,其中以四川西北部、新疆、青海、西藏牧區(qū)發(fā)病率最高,給我國畜牧業(yè)帶來了巨大的經濟損失,也給人類帶來了許多環(huán)境衛(wèi)生和健康安全問題。本研究擴增出細粒棘球絳蟲磷酸甘油酸激酶(Eg-PGK)和泛素結合酶D2(Eg-E2D2)基因,分析其基本特征,為細粒棘球絳蟲相關蛋白的研究提供重要的參考數(shù)據(jù)和資料。同時,還克隆、融合表達出細粒棘球絳蟲脂肪酸結合蛋白和A31蛋白(EgFABP-EgA31)以及細粒棘球絳蟲硫氧還蛋白過氧化物酶和原肌球蛋白(EgTPx-EgTrp),免疫犬后評價其免疫保護效果。一、細粒棘球絳蟲磷酸甘油酸激酶基因的克隆、表達及特征分析本研究對Eg-PGK進行了克隆和原核表達,結果顯示Eg-PGK大小為1248 bp,編碼了415個氨基酸。免疫印跡實驗顯示rEg-PGK具有反應原性。用間接免疫熒光定位方法對Eg-PGK進行定位分析,發(fā)現(xiàn)Eg...

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【學位級別】：碩士

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圖1Eg-PGKPCR擴增M：DNA分子質量標準MakerⅢ；1：PCR產物Figure1PCRamplificationofEg-PGK

19圖1Eg-PGKPCR擴增M：DNA分子質量標準MakerⅢ；1：PCR產物Figure1PCRamplificationofEg-PGKM:DNAmakerMakerⅢ;Lane1:Eg-PGK3.1.2Eg-PGK基因的生物信息學分析擴增出的細粒棘球絳蟲Eg-PGK基因長....

圖2Eg-PGK氨基酸序列比對分析

21圖2Eg-PGK氨基酸序列比對分析序列號：EchinococcusgranulosusPGK(GenBank:XP_024350594.1)；EchinococcusmultilocularisPGK(GenBank:CDS42716.1);Hymenolepismicros....

圖3Eg-PGK基因系統(tǒng)進化樹（ML樹）

22紅色三角形：催化位點。Figure2SequencealinmentofEg-PGKResiduesinvolvedinthesubstratebindingsiteareindicatedwithwhitetriangles,thoseinvolvedinhingeregi....

圖4不同IPTG濃度對重組蛋白Eg-PGK表達的影響

233.2rEg-PGK的表達與反應原性分析3.2.1IPTG濃度的優(yōu)化將pET32a-Eg-PGK重組菌在IPTG濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mmol/L的條件下進行誘導表達，結果顯示1.2mmol/L的濃度為其最佳濃度（圖4）。圖4不同IPTG濃度....

本文編號：3898617