背景肝細(xì)胞癌(HCC)是全球癌癥相關(guān)死亡的第三大原因。而且肝癌的病程早期癥狀不明顯,但晚期進(jìn)展卻十分迅速,這些特點(diǎn)導(dǎo)致肝癌的診治較為困難。盡管近年來(lái)肝癌的診斷與治療有著突飛猛進(jìn)的發(fā)展,但是患者的總體預(yù)后仍不容樂(lè)觀。目前,有多篇文獻(xiàn)報(bào)道提示泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)在多種人類癌癥中過(guò)表達(dá)并且可能扮演致癌基因的作用。然而,關(guān)于UUBE2C在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能、臨床病理意義等信息知之甚少。方法在本研究中,我們首先使用生物信息學(xué)的方法分析癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)資料,對(duì)肝癌患者體內(nèi)UBE2C mRNA表達(dá)水平與癌癥分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析。接著我們利用RT-PCR及免疫組織化學(xué)染色的方法分別在臨床肝細(xì)胞癌病人組織標(biāo)本中驗(yàn)證了數(shù)據(jù)庫(kù)中得出的結(jié)果,并分析了UUBE2C的表達(dá)情況與肝癌臨床病理學(xué)及預(yù)后的聯(lián)系。此后,通過(guò)在肝癌細(xì)胞系SK-Hep-1和SMMC-7721中構(gòu)建敲低穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,采用了CCK-8、克隆形成及transwell等方法探討了UBE2C在肝癌中的生物學(xué)功能。此外,我們利用兩種常用的化療藥物阿霉素(ADR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)及分子靶向藥物索拉菲...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 前言
    1.1 原發(fā)性肝癌
        1.1.1 原發(fā)性肝癌概述
        1.1.2 流行病學(xué)
        1.1.3 病因及機(jī)制
        1.1.4 目前常用診斷方法
        1.1.5 目前常用治療方法
    1.2 蛋白酶體
    1.3 泛素
    1.4 APC/C
    1.5 泛素結(jié)合酶家族與癌癥
    1.6 泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)
    1.7 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要藥品和試劑
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)所用耗材
        2.1.3 主要試劑配制方法
        2.1.4 主要設(shè)備
        2.1.5 細(xì)胞株,工程菌株
        2.1.6 臨床組織標(biāo)本
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 UBE2C敲低細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2.3 CCK-8實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.7 免疫組織化學(xué)
        2.2.8 組織RNA提取
        2.2.9 組織cDNA合成
        2.2.10 實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)方法
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 基于TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析挖掘UBE2C在肝癌中的表達(dá)及預(yù)后意義
    3.2 UBE2C在肝癌組織標(biāo)本中高表達(dá)且與不良預(yù)后相關(guān)
    3.3 敲低UBE2C抑制肝癌細(xì)胞增殖能力
    3.4 敲低UBE2C抑制肝癌細(xì)胞侵襲遷移
    3.5 UBE2C降低肝癌細(xì)胞化療敏感性
    3.6 UBE2C降低肝癌細(xì)胞對(duì)靶向藥物索拉菲尼的敏感性
第四章 討論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附件



本文編號(hào)：3897577