背景肝細胞癌(HCC)是全球癌癥相關死亡的第三大原因。而且肝癌的病程早期癥狀不明顯,但晚期進展卻十分迅速,這些特點導致肝癌的診治較為困難。盡管近年來肝癌的診斷與治療有著突飛猛進的發(fā)展,但是患者的總體預后仍不容樂觀。目前,有多篇文獻報道提示泛素結合酶E2C(UBE2C)在多種人類癌癥中過表達并且可能扮演致癌基因的作用。然而,關于UUBE2C在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的生物學功能、臨床病理意義等信息知之甚少。方法在本研究中,我們首先使用生物信息學的方法分析癌癥基因組圖譜(TCGA)數據庫中的數據資料,對肝癌患者體內UBE2C mRNA表達水平與癌癥分級及預后的關系進行分析。接著我們利用RT-PCR及免疫組織化學染色的方法分別在臨床肝細胞癌病人組織標本中驗證了數據庫中得出的結果,并分析了UUBE2C的表達情況與肝癌臨床病理學及預后的聯(lián)系。此后,通過在肝癌細胞系SK-Hep-1和SMMC-7721中構建敲低穩(wěn)轉細胞系,采用了CCK-8、克隆形成及transwell等方法探討了UBE2C在肝癌中的生物學功能。此外,我們利用兩種常用的化療藥物阿霉素(ADR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)及分子靶向藥物索拉菲...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 前言
    1.1 原發(fā)性肝癌
        1.1.1 原發(fā)性肝癌概述
        1.1.2 流行病學
        1.1.3 病因及機制
        1.1.4 目前常用診斷方法
        1.1.5 目前常用治療方法
    1.2 蛋白酶體
    1.3 泛素
    1.4 APC/C
    1.5 泛素結合酶家族與癌癥
    1.6 泛素結合酶E2C(UBE2C)
    1.7 TCGA數據庫
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要藥品和試劑
        2.1.2 主要實驗所用耗材
        2.1.3 主要試劑配制方法
        2.1.4 主要設備
        2.1.5 細胞株,工程菌株
        2.1.6 臨床組織標本
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 UBE2C敲低細胞系的構建
        2.2.3 CCK-8實驗
        2.2.4 克隆形成實驗
        2.2.5 Transwell實驗
        2.2.6 蛋白質免疫印跡
        2.2.7 免疫組織化學
        2.2.8 組織RNA提取
        2.2.9 組織cDNA合成
        2.2.10 實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)
        2.2.11 統(tǒng)計方法
第三章 實驗結果與分析
    3.1 基于TCGA數據庫分析挖掘UBE2C在肝癌中的表達及預后意義
    3.2 UBE2C在肝癌組織標本中高表達且與不良預后相關
    3.3 敲低UBE2C抑制肝癌細胞增殖能力
    3.4 敲低UBE2C抑制肝癌細胞侵襲遷移
    3.5 UBE2C降低肝癌細胞化療敏感性
    3.6 UBE2C降低肝癌細胞對靶向藥物索拉菲尼的敏感性
第四章 討論與展望
參考文獻
致謝
附件



本文編號：3897577