目的:探究三種由全基因組外顯子測序篩選所得的PSIS可能致病基因體外的功能驗證,為垂體柄中斷綜合征病因研究的體內實驗提供理論依據(jù)。方法:利用全基因組外顯子測序技術對1例合并中樞性性早熟的垂體柄中斷綜合征患兒及父母(一共三例,父母為對照)進行基因,經過對比和深入分析,初步確定可能的致病基因。針對上述的基因,首先進行確認,進一步設計小干擾RNA(siRNA)分別轉染至GH3細胞內,每種基因均設置實驗紙陰性對照組(Negative Control Group,NC)、空白對照組(Blank Group)。通過RT-PCR篩選出各基因最佳的siRNA敲低序列以用于復篩,Western Blot(WB)復篩各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表達,以確定目標基因進行下一步研究。依次運用CCK-8(cell counting kit-8)檢測細胞增殖能力及形態(tài),細胞劃痕實驗檢測細胞遷移,酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測細胞分泌功能,WB檢測垂體特異性轉錄因子-1(pit-oct-uncclass 1 homeobox 1,POU1F1...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻
第一部分: 1例合并中樞性性早熟垂體柄中斷綜合征患兒臨床資料及全基因組外顯子測序分析
    引言
    研究對象和方法
    結果
    討論
    結論
    參考文獻
第二部分: 全基因組外顯子測序發(fā)現(xiàn)的三種可能致病基因的體外功能研究
    引言
    研究對象和方法
    結果
    討論
    結論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3887805