前言:胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,目前其臨床治療效果仍不理想。因此,闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制對研發(fā)新型治療靶點、改善胃癌患者預后具有重要意義。S100A4是鈣離子結(jié)合蛋白S100家族的成員之一,本課題組前期研究已證實S100A4高表達與胃癌細胞的增殖、體外遷移和凋亡等密切相關(guān)。GDF15是S100A4下游的重要基因,參與介導S100A4對胃癌細胞增殖、凋亡和干樣特性的影響。MiR-3189編碼基因位于GDF15基因的內(nèi)含子內(nèi),目前已有研究表明miR-3189-3p在人類不同腫瘤中發(fā)揮不同的生物學功能,但在胃癌細胞中的表達狀態(tài)和功能仍然未見報道。鑒于S100A4可以調(diào)控GDF15表達,我們推測S100A4可能也參與調(diào)控miR-3189-3p的表達,且miR-3189-3p可能介導S100A4對胃癌細胞MGC803的生物學特性的影響。通過生物信息學軟件預測miR-3189-3p下游的靶基因,根據(jù)相關(guān)表達及功能挑選出CFL2作為候選靶基因。CFL2(cofilin-2)是肌動蛋白結(jié)合蛋白ADF/cofilins家族的成員之一。前期研究發(fā)現(xiàn)人體中CFL2主要在肌肉組織中表達并參與肌肉的發(fā)...

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【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 ：miR-3189-3p增強S100A4-siRNA對胃癌細胞增殖、遷移和干細胞樣特性的抑制作用
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 細胞系
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 生物信息學網(wǎng)址和計算機分析軟件
        2.4 實驗方法
            2.4.1 細胞培養(yǎng)
            2.4.2 細胞轉(zhuǎn)染
            2.4.3 細胞總RNA提取
            2.4.4 反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR檢測mRNA及miRNA表達水平
            2.4.5 CCK8細胞增殖實驗
            2.4.6 Transwell實驗
            2.4.7 劃痕實驗
            2.4.8 低吸附懸浮培養(yǎng)觀察細胞成球能力
            2.4.9 軟瓊脂集落形成實驗
            2.4.10 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 S100A4基因沉默抑制胃癌細胞MGC803中miR-3189-3p表達
        3.2 MiR-3189-3p抑制胃癌細胞MGC803增殖
        3.3 MiR-3189-3p抑制胃癌細胞MGC803遷移
        3.4 MiR-3189-3p對胃癌細胞MGC803干樣特性的影響
        3.5 MiR-3189-3pmimics增強S100A4-siRNA對MGC803細胞增殖、遷移及干樣特
    4 討論
第二部分 ：miR-3189-3p靶向CFL2基因影響胃癌細胞MGC803的增殖、遷移和糖酵解
    5 前言
    6 材料和方法
        6.1 細胞系
        6.2 主要試劑和儀器
            6.2.1 主要試劑
            6.2.2 主要儀器
        6.3 生物信息學網(wǎng)址和計算機分析軟件
        6.4 實驗方法
            6.4.1 細胞培養(yǎng)
            6.4.2 細胞轉(zhuǎn)染
            6.4.3 細胞總RNA提取
            6.4.4 實時定量PCR檢測mRNA表達水平
            6.4.5 Westernblotting檢測細胞中蛋白表達
            6.4.6 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>            6.4.7 CCK8細胞增殖實驗
            6.4.8 Transwell實驗
            6.4.9 劃痕實驗
            6.4.10 生存分析
            6.4.11 lactate產(chǎn)量測定
            6.4.12 乳酸脫氫酶(LDH)活性測定
            6.4.13 統(tǒng)計學分析
    7 結(jié)果
        7.1 CFL2是miR-3189-3p的直接靶基因
        7.2 CFL2-siRNA抑制MGC803細胞的增殖和遷移
        7.3 CFL2介導miR-3189-3p在胃癌MGC803細胞中的功能效應(yīng)
        7.4 CFL2是胃癌的預后不良因子
        7.5 miR-3189-3p抑制胃癌MGC803細胞糖酵解
        7.6 miR-3189-3p對胃癌MGC803細胞LDH活性及糖酵解相關(guān)基因表達的影響..
        7.7 CFL2促進胃癌MGC803細胞糖酵解
        7.8 CFL2對胃癌MGC803細胞LDH活性及糖酵解相關(guān)基因表達的影響
    8 討論
    9 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3876474