前言:胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,目前其臨床治療效果仍不理想。因此,闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)研發(fā)新型治療靶點(diǎn)、改善胃癌患者預(yù)后具有重要意義。S100A4是鈣離子結(jié)合蛋白S100家族的成員之一,本課題組前期研究已證實(shí)S100A4高表達(dá)與胃癌細(xì)胞的增殖、體外遷移和凋亡等密切相關(guān)。GDF15是S100A4下游的重要基因,參與介導(dǎo)S100A4對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡和干樣特性的影響。MiR-3189編碼基因位于GDF15基因的內(nèi)含子內(nèi),目前已有研究表明miR-3189-3p在人類不同腫瘤中發(fā)揮不同的生物學(xué)功能,但在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)狀態(tài)和功能仍然未見報(bào)道。鑒于S100A4可以調(diào)控GDF15表達(dá),我們推測(cè)S100A4可能也參與調(diào)控miR-3189-3p的表達(dá),且miR-3189-3p可能介導(dǎo)S100A4對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803的生物學(xué)特性的影響。通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-3189-3p下游的靶基因,根據(jù)相關(guān)表達(dá)及功能挑選出CFL2作為候選靶基因。CFL2(cofilin-2)是肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白ADF/cofilins家族的成員之一。前期研究發(fā)現(xiàn)人體中CFL2主要在肌肉組織中表達(dá)并參與肌肉的發(fā)...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

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摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 ：miR-3189-3p增強(qiáng)S100A4-siRNA對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和干細(xì)胞樣特性的抑制作用
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 細(xì)胞系
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 生物信息學(xué)網(wǎng)址和計(jì)算機(jī)分析軟件
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.4.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.4.3 細(xì)胞總RNA提取
            2.4.4 反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)mRNA及miRNA表達(dá)水平
            2.4.5 CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            2.4.6 Transwell實(shí)驗(yàn)
            2.4.7 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.4.8 低吸附懸浮培養(yǎng)觀察細(xì)胞成球能力
            2.4.9 軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)
            2.4.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 S100A4基因沉默抑制胃癌細(xì)胞MGC803中miR-3189-3p表達(dá)
        3.2 MiR-3189-3p抑制胃癌細(xì)胞MGC803增殖
        3.3 MiR-3189-3p抑制胃癌細(xì)胞MGC803遷移
        3.4 MiR-3189-3p對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803干樣特性的影響
        3.5 MiR-3189-3pmimics增強(qiáng)S100A4-siRNA對(duì)MGC803細(xì)胞增殖、遷移及干樣特
    4 討論
第二部分 ：miR-3189-3p靶向CFL2基因影響胃癌細(xì)胞MGC803的增殖、遷移和糖酵解
    5 前言
    6 材料和方法
        6.1 細(xì)胞系
        6.2 主要試劑和儀器
            6.2.1 主要試劑
            6.2.2 主要儀器
        6.3 生物信息學(xué)網(wǎng)址和計(jì)算機(jī)分析軟件
        6.4 實(shí)驗(yàn)方法
            6.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            6.4.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            6.4.3 細(xì)胞總RNA提取
            6.4.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平
            6.4.5 Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞中蛋白表達(dá)
            6.4.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
            6.4.7 CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            6.4.8 Transwell實(shí)驗(yàn)
            6.4.9 劃痕實(shí)驗(yàn)
            6.4.10 生存分析
            6.4.11 lactate產(chǎn)量測(cè)定
            6.4.12 乳酸脫氫酶(LDH)活性測(cè)定
            6.4.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    7 結(jié)果
        7.1 CFL2是miR-3189-3p的直接靶基因
        7.2 CFL2-siRNA抑制MGC803細(xì)胞的增殖和遷移
        7.3 CFL2介導(dǎo)miR-3189-3p在胃癌MGC803細(xì)胞中的功能效應(yīng)
        7.4 CFL2是胃癌的預(yù)后不良因子
        7.5 miR-3189-3p抑制胃癌MGC803細(xì)胞糖酵解
        7.6 miR-3189-3p對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞LDH活性及糖酵解相關(guān)基因表達(dá)的影響..
        7.7 CFL2促進(jìn)胃癌MGC803細(xì)胞糖酵解
        7.8 CFL2對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞LDH活性及糖酵解相關(guān)基因表達(dá)的影響
    8 討論
    9 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3876474