大豆是我國(guó)種植最廣泛的經(jīng)濟(jì)作物之一,是世界上重要的油料作物,具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。光信號(hào)是保障大豆正常生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因素。光敏色素(Phys)通過(guò)在植物體內(nèi)感知光信號(hào)后,與光敏色素互作因子(PIFs)相互作用從而調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育。PIFs在植物中不僅能夠整合光信號(hào)傳導(dǎo),也參與激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中也起著十分重要的作用。目前,有關(guān)PIFs的研究在擬南芥中相對(duì)透徹,大豆中對(duì)GmPIFs基因家族的研究比較少。本研究,從大豆品種吉林32中克隆GmPIF1轉(zhuǎn)錄因子,并對(duì)它進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析和功能驗(yàn)證,分析結(jié)果如下:1.利用RT-PCR的方法從大豆品種吉林32中克隆GmPIF1基因的CDS,全長(zhǎng)1530bp,編碼510個(gè)氨基酸,含有APA、APB和bHLH保守結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)域,屬于bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族,亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)在細(xì)胞核中。2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),研究了GmPIF1基因在大豆不同組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,GmPIF1在根、莖、葉、花、20d、30d、50d胚中均有表達(dá),且表達(dá)量表現(xiàn)為葉>花>50d胚>根>30d胚>莖>20d胚...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文做略語(yǔ)表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 PIFs轉(zhuǎn)錄因子的概述
        1.1.1 PIFs轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征
        1.1.2 PIFs轉(zhuǎn)錄因子光依賴性的磷酸化和降解
    1.2 PIFs轉(zhuǎn)錄因子的功能
        1.2.1 PIFs參與調(diào)解去黃化
        1.2.2 PIFs參與調(diào)控種子萌發(fā)
        1.2.3 PIFs參與調(diào)控下胚軸伸長(zhǎng)
        1.2.4 PIFs參與調(diào)控下胚軸負(fù)重力
        1.2.5 PIFs參與調(diào)節(jié)植物開花
        1.2.6 PIFs參與植物干旱響應(yīng)
        1.2.7 PIFs參與植物低溫響應(yīng)
    1.3 調(diào)節(jié)種子萌發(fā)的因素
        1.3.1 光信號(hào)調(diào)節(jié)種子萌發(fā)
        1.3.2 激素調(diào)節(jié)種子萌發(fā)
        1.3.3 其他因素調(diào)節(jié)種子萌發(fā)
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法研究
        1.4.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.4.2 酵母雙雜交
        1.4.3 高效液相色譜法
    1.5 本文研究目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
第2章 大豆轉(zhuǎn)錄因子基因GmPIF1 的克隆及序列分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 工具酶及試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 PCR引物
    2.2 方法
        2.2.1 大豆總RNA的提取
        2.2.2 cDNA的合成
        2.2.3 大豆GmPIF1的PCR擴(kuò)增
        2.2.4 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.5 大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.6 回收產(chǎn)物連接pMD18-T載體
        2.2.7 凍融法轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.8 菌液PCR鑒定
        2.2.9 提取重組質(zhì)粒
        2.2.10 大豆GmPIF1 基因的序列分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 大豆GmPIF1 基因c DNA全長(zhǎng)序列的獲得
        2.3.2 大豆GmPIF1 基因的生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 Gm PIF1 基因功能的初步分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株及載體
        3.1.3 工具酶及試劑
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.1.5 PCR引物
    3.2 方法
        3.2.1 GmPIF1 在大豆各組織的表達(dá)情況
        3.2.2 原核表達(dá)
        3.2.3 亞細(xì)胞定位
        3.2.4 酵母自激活驗(yàn)證
        3.2.5 酵母雙雜
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 GmPIF1 在大豆不同組織的表達(dá)
        3.3.2 表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.3 GmPIF1 重組質(zhì)粒在原核系統(tǒng)的表達(dá)
        3.3.4 GmPIF1 重組質(zhì)粒在煙草表皮細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)
        3.3.5 GmPIF1 的酵母自激活活性驗(yàn)證
        3.3.6 酵母雙雜驗(yàn)證GmPIF1 的互作蛋白
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 Gm PIF1 在擬南芥中的表達(dá)及功能分析
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株及載體
        4.1.3 工具酶及試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
        4.1.5 PCR引物
    4.2 方法
        4.2.1 構(gòu)建表達(dá)載體pCHF3300-GmPIF1
        4.2.2 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.3 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.4 擬南芥葉片DNA的提取
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選及鑒定
        4.2.6 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥在光處理下的萌發(fā)率測(cè)定
        4.2.7 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥在紅光和遠(yuǎn)紅光處理后萌發(fā)相關(guān)基因的表達(dá)
        4.2.8 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥在紅光和遠(yuǎn)紅光處理后GA和 ABA含量測(cè)定
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 植物表達(dá)載體pCHF3300-GmPIF1 的構(gòu)建
        4.3.2 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥陽(yáng)性植株的篩選及鑒定
        4.3.4 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥在不同光處理下的萌發(fā)率
        4.3.5 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥光處理后萌發(fā)相關(guān)基因的表達(dá)量
        4.3.6 T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥紅光和遠(yuǎn)紅光處理后GA和 ABA含量
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 結(jié)果與展望
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3871633