本文關(guān)鍵詞：增齡性胸腺萎縮相關(guān)基因的檢測(cè)及成年小鼠胸腺上皮細(xì)胞的分離富集，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：胸腺是機(jī)體內(nèi)重要的淋巴器官,空間上有序地指導(dǎo)淋巴前體細(xì)胞發(fā)育為成熟T細(xì)胞,為外周提供免疫應(yīng)答的“主力軍”。但是青春期后胸腺發(fā)生增齡性萎縮,功能逐漸丟失,導(dǎo)致初始T細(xì)胞輸出進(jìn)行性減少,制約了外周T細(xì)胞的多樣性,使感染、自身免疫病的患病風(fēng)險(xiǎn)增加。前期研究發(fā)現(xiàn)胸腺微環(huán)境的改變而非造血干細(xì)胞功能/數(shù)量的減少,可能是增齡性胸腺萎縮的主要誘因。其中TECs是胸腺微環(huán)境中最重要的細(xì)胞成分,但是由于其數(shù)量少,分離較困難,使得TECs相關(guān)研究進(jìn)展緩慢。本研究以小鼠胸腺為研究對(duì)象,分析增齡性胸腺萎縮過程中胸腺的形態(tài)變化及TECs特異性基因的表達(dá)變化之間的關(guān)系,同時(shí)優(yōu)化成年TECs的分離富集方法,為進(jìn)一步揭示胸腺免疫衰老的機(jī)制、TECs建系及再生胸腺等相關(guān)研究提供理論依據(jù)。目的:(1)探討增齡性胸腺萎縮過程中胸腺的形態(tài)變化及TECs重要分化發(fā)育基因的表達(dá)變化之間的關(guān)系,以闡明胸腺微環(huán)境對(duì)增齡性胸腺萎縮的誘導(dǎo)作用;(2)探尋一種具有準(zhǔn)確體內(nèi)代表性的高效TECs分離富集方法,以期為后續(xù)分子譜系分析、TECs體外建系提供高豐度的TECs。材料和方法:(1)小鼠胸腺增齡性萎縮實(shí)驗(yàn)BABL/c小鼠按年齡分為A,B,C 3組,每組2只小鼠,實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次,共18只。A組:1月齡小鼠;B組:4月齡小鼠;C組:16月齡小鼠。每組小鼠,一只用于做石蠟包埋,通過HE染色觀察各組胸腺形態(tài)學(xué)變化;一只用于提取RNA,通過realtime-PCR檢測(cè)各組胸腺TECs重要分化發(fā)育基因Fox N1、AIRE和Dll4的基因表達(dá)水平。(2)TECs分離富集實(shí)驗(yàn)6~8周齡BABL/c小鼠分為9組,每組3只,實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次,共81只。小鼠TECs分離實(shí)驗(yàn)根據(jù)酶的種類與工作濃度隨機(jī)分成5個(gè)分離組:collagenase V 1.0g·L~（-1）組和Liberase TM 0.5、0.7、1.0及2.0 U?m L-1組。采用分離實(shí)驗(yàn)得出的最適酶分離濃度(Liberase TM 1.0 U?m L-1)進(jìn)行TECs的分離與富集。富集實(shí)驗(yàn)分為4組:未進(jìn)行富集處理的對(duì)照組和MACS、Percoll及Ficoll富集組。各實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞懸液通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞活力、TSCs比例以及TSCs中TECs重要標(biāo)志上皮細(xì)胞黏附分子(Ep CAM)的表達(dá)豐度,Percoll富集組與對(duì)照組還進(jìn)行TECs的2個(gè)亞群——皮質(zhì)TECs(c TECs)和髓質(zhì)TECs(m TECs)比例的檢測(cè)。結(jié)果:(1)小鼠胸腺增齡性萎縮實(shí)驗(yàn)A組胸腺皮、髓質(zhì)區(qū)結(jié)構(gòu)比較完整,皮、髓質(zhì)交界清晰;B組胸腺結(jié)構(gòu)出現(xiàn)脂肪空泡,但皮、髓質(zhì)交界暫且可辨,PVS區(qū)暫無脂肪浸潤(rùn);C組胸腺結(jié)構(gòu)出現(xiàn)多處空泡結(jié)構(gòu)以及大面積的囊腫結(jié)構(gòu),PVS區(qū)被脂肪組織浸潤(rùn)。此外,B組Fox N1、AIRE、Dll4 3個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量均明顯低于A組(P0.0001),但其均明顯高于C組(P0.05),即3個(gè)基因表達(dá)均增齡性減少。(2)TECs分離富集實(shí)驗(yàn)Liberase TM 1.0 U?m L-1組中TSCs的產(chǎn)量明顯高于Liberase TM 0.5和0.7 U?m L-1組(P0.01),并且其細(xì)胞活力及消化時(shí)間均優(yōu)于collagenase V 1.0g·L~（-1）組(P0.01);3個(gè)富集組的細(xì)胞活力均較高,且組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與對(duì)照組比較,3個(gè)富集組TECs比例顯著增加(P0.05或P0.01);在3個(gè)富集組中,Percoll富集組富集的TECs比例高于其他2個(gè)富集組(P0.01);與對(duì)照組比較,Percoll富集組c TECs和m TECs的百分比及c TEC/m TEC的比值無明顯變化(P0.05)。結(jié)論:(1)在胸腺微環(huán)境中,Fox N1基因的增齡性丟失誘發(fā)TECs減少,進(jìn)一步導(dǎo)致TECs特異性基因AIRE、Dll4表達(dá)增齡性降低,胸腺功能性組織逐漸減少,脂肪組織逐漸浸潤(rùn)胸腺組織,致使老年胸腺髓質(zhì)區(qū)出現(xiàn)囊腫、PVS區(qū)脂肪化,從加工(陽(yáng)性選擇)、檢驗(yàn)(陰性選擇)、運(yùn)輸(PVS區(qū))三重環(huán)節(jié)阻礙胸腺細(xì)胞生成作用,最終弱化衰老胸腺的功能。(2)Liberase TM較collagenase V更適用于消化成年小鼠胸腺,且其最適消化濃度為1.0 U?m L-1。本研究采用的3種富集方法均可以提高TECs比例,對(duì)細(xì)胞的破壞均較小;且Percoll富集法最有效,在富集后不影響TECs亞群細(xì)胞比例,便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。
【關(guān)鍵詞】：胸腺 增齡性胸腺萎縮 胸腺上皮細(xì)胞 分離富集
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R583
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞對(duì)照表12-15
• 第1章 緒論15-16
• 第2章 綜述16-23
• 2.1 胸腺的結(jié)構(gòu)、功能及器官發(fā)生16-18
• 2.2 胸腺的增齡性萎縮18-21
• 2.3 TECs分離方法的研究現(xiàn)狀21-23
• 第3章 材料和方法23-32
• 3.1 主要試劑和設(shè)備23-25
• 3.1.1 試劑23-24
• 3.1.2 器材與儀器24-25
• 3.2 主要試劑配制25-26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物26
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物26
• 3.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組26
• 3.4 實(shí)驗(yàn)方法26-31
• 3.4.1 樣品采集26
• 3.4.2 石蠟切片及HE染色26-27
• 3.4.3 Realtime-PCR27-29
• 3.4.4 細(xì)胞懸液的制備29
• 3.4.5 分離實(shí)驗(yàn)29
• 3.4.6 富集實(shí)驗(yàn)29-30
• 3.4.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)30-31
• 3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-32
• 第4章 結(jié)果32-41
• 4.1 增齡性胸腺萎縮實(shí)驗(yàn)32-35
• 4.1.1 各組胸腺組織的形態(tài)學(xué)變化32-33
• 4.1.2 各組胸腺組織基因表達(dá)水平的檢測(cè)33-35
• 4.2 TECs的分離實(shí)驗(yàn)35-37
• 4.2.1 消化時(shí)間35
• 4.2.2 細(xì)胞活力35
• 4.2.3 TSCs的產(chǎn)量35
• 4.2.4 TECs的產(chǎn)量35-37
• 4.3 TECs的富集實(shí)驗(yàn)37-41
• 4.3.1 3種TECs富集方法的細(xì)胞活力、TSCs和TECs比例37-39
• 4.3.2 Percoll富集組中c TECs與m TECs的比例39-41
• 第5章 討論41-45
• 5.1 增齡性胸腺萎縮實(shí)驗(yàn)41-42
• 5.2 TECs的分離實(shí)驗(yàn)42-43
• 5.3 TECs的富集實(shí)驗(yàn)43-45
• 第6章 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果52-53
• 致謝53

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姜世勃;胸腺萎縮及其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1983年02期

2 姜世勃;李文簡(jiǎn);;胸腺萎縮及其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1984年01期

3 李淑珍,韓禮;胸腺萎縮與小兒死亡[J];臨床兒科雜志;1985年06期

4 李彬祥;;胸腺的影象診斷(綜述)[J];山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1986年03期

5 周彩菊,唐開勇;胸腺萎縮[J];重慶醫(yī)藥;1988年03期

6 唐小奈;;285例胎兒及嬰幼兒尸檢胸腺形態(tài)學(xué)觀察[J];首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年04期

7 楊梅懷,白玲,朱宗令;胸腺萎縮的掃描電鏡觀察[J];青島醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1989年01期

8 閻萍,袁培英,王德林,王紀(jì)芳;繼發(fā)性胸腺萎縮:附31例臨床病理分析[J];臨床兒科雜志;1991年04期

9 劉志剛,王吉安;嚴(yán)重感染與繼發(fā)性胸腺萎縮(附2例尸檢結(jié)果)[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;1991年01期

10 馮雪蓮,林久治,崔小岱,熊健,吳莎;胸腺繼發(fā)萎縮的病理學(xué)研究[J];北京醫(yī)學(xué);1993年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 徐杰;;胸腺萎縮和免疫功能低下可能是癌癥的病因和發(fā)病機(jī)理之一[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

2 劉世榮;段煉;康寧;崔蓮仙;何維;;IH1分子對(duì)NF-κB細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的影響[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

3 金國(guó)琴;戴薇薇;張學(xué)禮;周國(guó)琪;邱宏;徐品初;趙偉康;;大鼠大腦邊緣系統(tǒng)-下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸和胸腺依賴性免疫功能的老年性變化及補(bǔ)腎方藥的作用[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2003年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 羅爭(zhēng)鳴徐蘭山;抑制胸腺萎縮抗衰老獲突破[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 畢明剛;胸腺淋巴細(xì)胞分化與Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系及六味地黃湯的作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 齊慧慧;增齡性胸腺萎縮相關(guān)基因的檢測(cè)及成年小鼠胸腺上皮細(xì)胞的分離富集[D];吉林大學(xué);2016年

2 劉卉;松果體及褪黑素對(duì)大鼠胸腺trkB表達(dá)的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：增齡性胸腺萎縮相關(guān)基因的檢測(cè)及成年小鼠胸腺上皮細(xì)胞的分離富集，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：386806