背景:侵襲和轉移是惡性腫瘤最主要的死亡原因,乳腺癌和惡性黑色素瘤為常見高侵襲轉移性腫瘤。研究表明,抑癌基因PTEN突變或表達缺失顯著增強腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移能力,腫瘤微環(huán)境基質細胞PTEN功能狀態(tài)同樣極大地影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉移功能。荷瘤宿主整體PTEN降低或缺失是否會促進腫瘤細胞的增殖、遠處轉移和轉移癌的形成,迄今鮮有研究報道。目的:研究PTEN功能抑制或缺失對小鼠乳腺癌細胞和惡性黑色素瘤細胞增殖、遷移、侵襲和轉移能力的作用;研究荷瘤小鼠PTEN受抑時能否促進乳腺癌和惡性黑色素瘤的增殖和遠處轉移能力。方法:采用PTEN特異性抑制劑VO-Ohpic處理小鼠乳腺癌4T1細胞和惡性黑色素瘤B16細胞,MTT比色法和集落形成法檢測細胞的增殖活性,細胞劃痕愈合法和Transwell實驗分別測定細胞的遷移及侵襲能力,流式細胞術測定細胞周期時相分布,實時熒光定量RT-PCR法和Western blotting法檢測PTEN基因及相關蛋白的表達水平。BALB/c小鼠和C57BL/6J小鼠分別接種4T1細胞和B16細胞,分別建立小鼠乳腺癌、惡性黑色素瘤的原位移植瘤模型和轉移瘤模型,小...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 PTEN基因與惡性腫瘤的增殖和轉移
    1 PTEN基因的結構與功能
        1.1 PTEN基因的結構
        1.2 PTEN基因的功能
            1.2.1 抑制細胞增殖,促進細胞凋亡
            1.2.2 抑制細胞的粘附和遷移功能
            1.2.3 誘導細胞周期阻滯
            1.2.4 抑制新生血管生成
            1.2.5 調控胚胎的正常發(fā)育
            1.2.6 其它
    2 PTEN基因相關的調控信號通路
        2.1 PTEN/Pl3K/AKT/mTOR信號通路
        2.2 PTEN/FAK/p130cas信號通路
        2.3 PTEN/ERK/MAPK信號通路
        2.4 其它信號通路
    3 PTEN基因與腫瘤細胞增殖
    4 PTEN基因與腫瘤細胞凋亡
    5 PTEN基因與腫瘤浸潤轉移
    6 PTEN基因與腫瘤耐藥性
    7 PTEN基因與腫瘤微環(huán)境
    8 小結與展望
第二章 PTEN抑制乳腺癌細胞的增殖和轉移能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要實驗儀器
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 常用緩沖液、試劑的配制及準備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)和動物飼養(yǎng)
            2.2.2 細胞增殖活性的檢測和觀察
                2.2.2.1 MTT法檢測4T1的增殖活性
                2.2.2.2 細胞集落形成法觀察細胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR檢測PTEN基因的表達
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 細胞內總RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 實時熒光定量PCR檢測
            2.2.4 細胞侵襲和遷移檢測
                2.2.4.1 Transwell小室實驗觀察細胞的侵襲及遷移
                2.2.4.2 細胞劃痕法檢測細胞遷移
            2.2.5 FCM檢測細胞周期
            2.2.6 Western-blotting法測定相關蛋白的表達
                2.2.6.1 蛋白樣品制備
                2.2.6.2 BCA法對蛋白質進行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白
                2.2.6.4 轉膜
                2.2.6.5 封閉及抗體孵育
                2.2.6.6 ECL發(fā)光顯色及分析
            2.2.7 動物實驗
        2.3 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 VO-Ohpic有效抑制乳腺癌4T1 細胞PTEN表達
        3.2 PTEN功能降低促進乳腺癌4T1細胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增強乳腺癌4T1細胞的遷徙和侵襲能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信號通路
        3.5 4T1細胞PTEN功能受抑促進其在體內的生長與轉移
        3.6 小鼠機體PTEN功能受抑促進乳腺癌的生長與轉移
    4 討論
    小結
第三章 PTEN抑制惡性黑色素瘤細胞的增殖和轉移能力
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要實驗儀器
            2.1.2 主要試劑與耗材
            2.1.3 常用緩沖液、試劑的配制及準備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)和動物飼養(yǎng)
            2.2.2 細胞增殖活性的檢測和觀察
                2.2.2.1 MTT法檢測B16細胞的增殖活性
                2.2.2.2 結晶紫染色觀察B16細胞的增殖活性
            2.2.3 定量RT-PCR檢測PTEN基因的表達
                2.2.3.1 引物序列
                2.2.3.2 細胞內總RNA抽提
                2.2.3.3 cDNA合成
                2.2.3.4 實時熒光定量PCR檢測
            2.2.4 細胞侵襲和遷移檢測
                2.2.4.1 Transwell小室實驗觀察B16 細胞的侵襲及遷移
                2.2.4.2 劃痕法檢測細胞遷移
            2.2.5 FCM檢測細胞周期
            2.2.6 WB法測定相關蛋白的表達
                2.2.6.1 蛋白樣品制備
                2.2.6.2 BCA法對蛋白質進行定量
                2.2.6.3 SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白
            2.2.7 動物實驗
        2.3 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 VO-Ohpic抑制小鼠惡性黑色素瘤B16 細胞PTEN表達
        3.2 PTEN功能降低促進惡性黑色素瘤B16細胞的增殖
        3.3 抑制PTEN增強黑色素瘤B16細胞的遷徙和侵襲能力
        3.4 抑制PTEN可活化PI3K/AKT信號通路
        3.5 B16細胞PTEN受抑增強其在體內的生長與轉移
        3.6 小鼠機體PTEN功能受抑增強惡性黑色素瘤的生長與轉移
    4 討論
    小結
結論
參考文獻
縮略詞表
攻讀學位期間完成的科研成果
致謝



本文編號：3863992