【目的】光作為一種環(huán)境信號(hào),可影響植物的基因表達(dá)、酶活性和形態(tài)建成。光敏色素互作因子在光信號(hào)傳導(dǎo)過程中起著重要作用。本研究旨在構(gòu)建水稻光敏色素互作因子OsPIL15的CRISPR/Cas9表達(dá)載體,創(chuàng)制OsPIL15突變體,挖掘水稻功能基因,豐富和完善水稻光信號(hào)調(diào)控分子機(jī)制。【方法】依據(jù)CRISPR/Cas9技術(shù)原理,設(shè)計(jì)OsPIL15突變靶點(diǎn)。將所設(shè)計(jì)靶序列在水稻基因組中進(jìn)行比對(duì),排除非特異性靶位點(diǎn),同時(shí)使該靶序列含有常用酶切位點(diǎn),方便后期突變體鑒定�；瘜W(xué)合成靶位點(diǎn)寡核苷酸序列并與載體pBUN411連接構(gòu)建CRISPR/Cas9表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入粳稻品種日本晴,以除草劑抗性標(biāo)記篩選獲得陽性轉(zhuǎn)基因植株。利用酶切法判斷T0代轉(zhuǎn)基因植株是否發(fā)生突變,結(jié)合測(cè)序結(jié)果分析突變單株的突變基因型。將靶點(diǎn)序列在水稻全基因組中進(jìn)行比對(duì)分析,選擇5個(gè)與靶序列同源性較高且錯(cuò)配在4 bp以內(nèi)的位點(diǎn)作為潛在脫靶位點(diǎn)進(jìn)行脫靶效應(yīng)評(píng)估,分析所設(shè)計(jì)靶序列特異性�！窘Y(jié)果】所構(gòu)建表達(dá)載體成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)OsPIL15的定向編輯,酶切顯示在選取的25株T0代轉(zhuǎn)基因植株中獲得15株突變體,其中包括5株純合突變體、6株...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)和CRISPR/Cas9表達(dá)載體構(gòu)建
    1.3 酶切和測(cè)序分析驗(yàn)證突變位點(diǎn)
    1.4 潛在脫靶位點(diǎn)分析
2 結(jié)果
    2.1 Os PIL15靶點(diǎn)設(shè)計(jì)和表達(dá)載體構(gòu)建
    2.2 Os PIL15 T0代突變體篩選鑒定
    2.3 Os PIL15 T1代突變體分析鑒定
    2.4 ospil15突變體脫靶效應(yīng)評(píng)估
    2.5 Os PIL15功能初步分析
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3863951