目的:本文擬以連接反應(yīng)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)為基礎(chǔ),構(gòu)建基于連接反應(yīng)的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增新方法,實(shí)現(xiàn)KRAS基因突變的高靈敏、高特異性檢測(cè)。方法:本研究首先對(duì)本方法的可行性進(jìn)行了驗(yàn)證。研究中突變KRAS DNA(mutant DNA,mut DNA)能夠與連接底物SLS1和SLS2互補(bǔ)配對(duì),在連接酶的作用下,特異地連接而形成啞鈴狀結(jié)構(gòu)(dumbbell-shaped structure,DSS)模板,從而啟動(dòng)下一步LAMP的擴(kuò)增反應(yīng),產(chǎn)生大量長(zhǎng)短不一的DNA雙鏈,這時(shí)熒光染料SYBR Green I鑲嵌到產(chǎn)生的DNA雙鏈中產(chǎn)生明顯的熒光信號(hào)。而與mut DNA相比,野生型KRAS DNA(wild-type DNA,wt DNA)與SLS2之間多了一個(gè)錯(cuò)配堿基,導(dǎo)致連接反應(yīng)不能進(jìn)行,不能進(jìn)行后續(xù)的LAMP放大,產(chǎn)生微弱的熒光信號(hào),由此對(duì)mut DNA和wt DNA進(jìn)行區(qū)分。在明確方案可行后,對(duì)實(shí)驗(yàn)中的錯(cuò)配位點(diǎn)、連接溫度、連接循環(huán)次數(shù)、Bst DNA聚合酶濃度和LAMP溫度進(jìn)行了優(yōu)化,然后在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英縮略詞對(duì)照表
中文摘要
英文摘要
前言
    技術(shù)路線
實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的基本原理及其在電化學(xué)生物傳感器上的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3863104