sm-Nvas是來自煙草的受水楊酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)雙重誘導(dǎo)的植物維管束特異表達(dá)的新基因,本文主要研究轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻的子代遺傳穩(wěn)定性、在轉(zhuǎn)基因水稻中的整合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因株系對稻瘟病的抗病性。取得如下研究結(jié)果:1.連續(xù)兩年種植15個轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻家系,提取兩代家系的基因組DNA用于sm-Nvas基因和轉(zhuǎn)基因標(biāo)記檢測。有4個家系無sm-Nvas基因和潮霉素抗性基因,但有轉(zhuǎn)基因載體部分原件。10個家系中有sm-Nvas基因及載體原件,它們在2代中都能穩(wěn)定遺傳,1個家系還處于分離狀態(tài)。2.在轉(zhuǎn)sm-Nvas基因陽性家系中,使用TAIL-PCR方法進(jìn)行T-DNA側(cè)翼序列分析以確定sm-Nvas基因在水稻基因組的插入位點(diǎn)。確定有8個轉(zhuǎn)基因家系sm-Nvas定位在水稻第6號染色體中,在這些株系中,有一個株系有轉(zhuǎn)基因雜合子株,其余株系是轉(zhuǎn)基因純合子。3.對已經(jīng)定位的轉(zhuǎn)sm-Nvas基因陽性植株的農(nóng)藝性狀的對比研究,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)sm-Nvas基因植株較轉(zhuǎn)基因受體品種除具有更好的水稻稻瘟病抗性外,且分蘗能力也更強(qiáng)。

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水稻抗稻瘟病研究
        1.1.1 水稻稻瘟病及其生活史
        1.1.2 水稻抗稻瘟病基因資源
        1.1.3 水稻抗稻瘟病基因的克隆及其應(yīng)用
        1.1.4 非水稻植物來源抗稻瘟病基因的克隆及應(yīng)用
    1.2 轉(zhuǎn)基因抗稻瘟病水稻育種研究
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因植物育種流程及安全評價
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因抗稻瘟病水稻育種的研究進(jìn)展
    1.3 非水稻植物來源抗稻瘟病基因sm-Nvas及其應(yīng)用
    1.4 本研究的意義
第二章 外源基因sm-Nvas在轉(zhuǎn)基因植株后代中的遺傳穩(wěn)定性檢測
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 試劑配制
        2.2.5 引物序列
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻種植
        2.3.2 CTAB法提取轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻總DNA(小量)
        2.3.3 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻陽性鑒定
        2.3.4 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻中轉(zhuǎn)基因標(biāo)記物的分子檢測
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻陽性鑒定
        2.4.2 pCAMBIAI1305.1∷sm-Nvas載體質(zhì)粒檢測引物
        2.4.3 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻中轉(zhuǎn)基因標(biāo)記物分子檢測
    2.5 討論
第三章 轉(zhuǎn)基因水稻中sm-Nvas在YTB中整合位點(diǎn)分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.4 試劑配制
        3.2.5 引物序列
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 CTAB法提取轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻總DNA
        3.3.2 外源sm-Nvas基因整合位點(diǎn)檢測
        3.3.3 TAIL-PCR產(chǎn)物純化、克隆和測序
        3.3.4 T-DNA側(cè)翼序列的驗(yàn)證
        3.3.5 T-DNA整個位點(diǎn)純合性檢測
    3.4 結(jié)果與分析
    3.5 討論
第四章 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻稻瘟病抗性分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.4 試劑配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因植株的種植
        4.3.2 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻總DNA的提取
        4.3.3 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因水稻陽性鑒定
        4.3.4 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因植株的稻瘟病抗性鑒定
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因植株陽性鑒定
        4.4.2 轉(zhuǎn)sm-Nvas基因植株抗病性鑒定
    4.5 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
碩士期間參與的研究項(xiàng)目及學(xué)術(shù)會議



本文編號：3846711