高等植物脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(LTP,lipid transfer protein)是一種小分子堿性蛋白。有研究表明LTP家族基因不僅參與細(xì)胞壁的松動還可以響應(yīng)環(huán)境脅迫應(yīng)答。因此本研究克隆并篩選耐鹽相關(guān)的白樺(Betulaplatyphylla Suk)LTP基因,并且初步分析其在抵抗鹽脅迫中的功能,獲得以下結(jié)果:通過白樺全基因組比對分析篩選獲得了 6條具有完整ORF的LTP基因序列,命名為BpLTP1-6。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示BpLTP1-6編碼區(qū)序列長度在350bp-400bp,均具有LTP家族的結(jié)構(gòu)域。BpLTP家族蛋白均為疏水性蛋白,蛋白高級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析顯示該家族蛋白由α螺旋、β折疊、β轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲相互盤繞、折疊三維構(gòu)象。BpLTP家族啟動子含有 ABRE、G-Box、MBS、TAC-element 等多種元件。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和亞細(xì)胞定位研究BpLTP基因及蛋白的表達(dá)模式。結(jié)果顯示LTP家族基因在葉中表達(dá)量普遍高于莖和根,僅有BpLTP3在莖中表達(dá)高于其它組織。6條基因?qū)}脅迫響應(yīng)程度和時(shí)間不同,但都受到鹽脅迫的誘導(dǎo)。BpLTP1、2、5基因受甘露醇脅迫誘導(dǎo),BpLTP3...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 植物脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究進(jìn)展
        1.1.1 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)及其分類
        1.1.2 LTP基因與鹽脅迫相關(guān)的研究進(jìn)展
        1.1.3 LTP基因與干旱脅迫相關(guān)的研究進(jìn)展
        1.1.4 LTP基因與冷脅迫相關(guān)的研究進(jìn)展
        1.1.5 LTP基因參與生物脅迫相關(guān)研究進(jìn)展
    1.2 研究目的及意義
2 白樺LTP家族基因克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體與菌種
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基配制
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 BpLTP基因鑒定
        2.2.2 BpLTP家族基因克隆
        2.2.3 目的基因片段的膠回收
        2.2.4 連接、轉(zhuǎn)化與測序
        2.2.5 LTP家族基因生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 白樺LTP家族基因的鑒定及克隆
        2.3.2 BpLTP蛋白結(jié)構(gòu)域分析
        2.3.3 LTP家族基因親水性分析
        2.3.4 LTP家族基因蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.3.5 LTP家族多序列比對分析
        2.3.6 LTP家族基因進(jìn)化樹分析
        2.3.7 白樺LTP基因啟動子序列分析
    2.4 本章小結(jié)
3 白樺LTP家族基因的表達(dá)模式分析
    3.1 LTP家族基因組織特異性及脅迫響應(yīng)表達(dá)分析
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 LTP家族蛋白亞細(xì)胞定位分析
        3.2.1 植物材料
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 載體和菌株
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 白樺LTP家族基因組織特異性表達(dá)分析
        3.3.2 LTP家族基因響應(yīng)NaCl脅迫處理的表達(dá)模式分析
        3.3.3 LTP家族基因響應(yīng)甘露醇脅迫的表達(dá)模式分析
        3.3.4 LIP家族基因響應(yīng)GA₃激素處理的表達(dá)模式分析
        3.3.5 白樺pBI121-GFP-BpLTPs載體構(gòu)建
        3.3.6 BpLTPS蛋白亞細(xì)胞定位分析
    3.4 本章小結(jié)
4 植物表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因功能分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 載體與菌種
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 藥品及培養(yǎng)基制備
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 過表達(dá)載體構(gòu)建及工程菌的制備
        4.2.2 BpLTP4轉(zhuǎn)基因煙草獲得
        4.2.3 BpLTPs瞬時(shí)侵染野生型白樺
        4.2.4 組織化學(xué)染色
        4.2.5 生理生化指標(biāo)測定
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 白樺pROKⅡ-BpLTPs載體構(gòu)建
        4.3.2 異源轉(zhuǎn)化煙草耐鹽功能分析
        4.3.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化白樺耐鹽功能分析
    4.4 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3841811