TCP轉(zhuǎn)錄因子是一類(lèi)植物特有的轉(zhuǎn)錄因子,廣泛參與到調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程當(dāng)中。本研究以白樺為試材,對(duì)TCP家族PCF亞類(lèi)BpTCP1和BpTCP2基因及啟動(dòng)子的組織部位表達(dá)特異性及激素與非生物脅迫應(yīng)答分析,并對(duì)過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因白樺株系進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育及抗旱耐鹽性研究,通過(guò)轉(zhuǎn)錄組及酵母單雜交對(duì)其下游靶基因進(jìn)行鑒定。研究結(jié)果如下:1.熒光定量PCR結(jié)果顯示,BpTCP1及BpTCP2基因在白樺葉片、莖節(jié)、頂芽、木質(zhì)部和韌皮部中均呈現(xiàn)不同程度的上調(diào)表達(dá);在激素與非生物脅迫應(yīng)答分析中,BpTCP1及BpTCP2基因的表達(dá)量均呈現(xiàn)出相應(yīng)變化。2.通過(guò)Infusion技術(shù)構(gòu)建BpTCP1基因啟動(dòng)子植物表達(dá)載體,利用PlantCARE軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示BpTCP1基因啟動(dòng)子中含有多個(gè)與激素、非生物脅迫、植株生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的元件。GUS染色結(jié)果表明,BpTCP1基因在植株的葉片及頂芽有表達(dá),對(duì)GA3、ABA及4種非生物脅迫產(chǎn)生應(yīng)答。進(jìn)一步表明BpTCP1基因?qū)χ参锶~片發(fā)育、激素及非生物脅迫應(yīng)答具有一定的作用。3.通過(guò)Gateway技術(shù)構(gòu)建BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)載體,并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了白樺的遺傳轉(zhuǎn)化...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 TCP轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與分類(lèi)
    1.2 TCP轉(zhuǎn)錄因子的功能
        1.2.1 TCP轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的功能研究
        1.2.2 TCP轉(zhuǎn)錄因子與植物激素信號(hào)的相互作用
    1.3 研究的目的與意義
    1.4 技術(shù)路線
2 BpTCP1及BpTCP2基因表達(dá)特性分析
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)試劑
        2.1.2 植物材料
    2.2 方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 BpTCP1及BpTCP2基因在白樺不同組織部位的表達(dá)特性分析
        2.3.2 BpTCP1及BpTCP2基因在白樺葉片發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)特性分析
        2.3.3 BpTCP1及BpTCP2基因激素應(yīng)答分析
        2.3.4 BpTCP1及BpTCP2基因非生物脅迫應(yīng)答分析
    2.4 本章小結(jié)
3 白樺BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子克隆及表達(dá)分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 方法
        3.2.1 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子克隆
        3.2.2 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)
        3.2.3 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子載體構(gòu)建
        3.2.4 白樺的遺傳轉(zhuǎn)化及分子檢測(cè)
        3.2.5 轉(zhuǎn)基因株系的GUS染色
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因株系的激素與非生物脅迫處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子克隆
        3.3.2 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子順式作用元件分析
        3.3.3 BpTCP1及BpTCP2啟動(dòng)子載體構(gòu)建
        3.3.4 白樺的遺傳轉(zhuǎn)化及分子檢測(cè)
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因株系的GUS染色
        3.3.6 轉(zhuǎn)基因株系的激素與非生物脅迫應(yīng)答分析
    3.4 本章小結(jié)
4 BpTCP1及BpTCP2基因的遺傳轉(zhuǎn)化及表型觀測(cè)
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 試劑
    4.2 方法
        4.2.1 BpTCP1及BpTCP2基因的克隆及載體構(gòu)建
        4.2.2 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌及白樺遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)
        4.2.4 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)白樺株系的表型觀測(cè)
        4.2.5 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)白樺株系內(nèi)源激素測(cè)定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 BpTCP1及BpTCP2基因的克隆及載體構(gòu)建
        4.3.2 農(nóng)桿菌檢測(cè)及白樺遺傳轉(zhuǎn)化
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)
        4.3.4 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2基因過(guò)表達(dá)株系的表型觀測(cè)
        4.3.5 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2基因過(guò)表達(dá)白樺株系內(nèi)源激素測(cè)定
    4.4 本章小結(jié)
5 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)白樺株系的抗逆性分析
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)株系的耐鹽性分析
        5.2.2 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)株系的抗旱性分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)株系的耐鹽性分析
        5.3.2 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)株系的抗旱性分析
    5.4 本章小結(jié)
6 BpTCP1及BpTCP2過(guò)表達(dá)白樺株系轉(zhuǎn)錄組分析
    6.1 材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 主要試劑
    6.2 方法
        6.2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        6.2.2 RT-PCR驗(yàn)證
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 RNA-Seq測(cè)序質(zhì)量評(píng)估及參考基因組的比對(duì)
        6.3.2 轉(zhuǎn)BpTCP1及BpTCP2白樺差異表達(dá)基因的篩選
        6.3.3 差異基因的功能分類(lèi)
        6.3.4 差異基因的代謝途徑
        6.3.5 差異表達(dá)基因分析
        6.3.6 RT-PCR驗(yàn)證
    6.4 本章小結(jié)
7 白樺BpTCP1及BpTCP2基因下游靶基因驗(yàn)證
    7.1 材料
    7.2 方法
        7.2.1 誘餌載體構(gòu)建
        7.2.2 效應(yīng)載體構(gòu)建
        7.2.3 3-AT濃度篩選
        7.2.4 酵母單雜交
    7.3 結(jié)果與分析
        7.3.1 效應(yīng)載體及誘餌載體的構(gòu)建
        7.3.2 效應(yīng)載體及誘餌載體的自激活活性驗(yàn)證
        7.3.3 酵母單雜交
    7.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3828885