自噬(autophagy)是細(xì)胞的自我消化過程,是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)降解的主要途徑。自噬的發(fā)生主要經(jīng)歷兩個(gè)階段,一是自噬體的形成,二是自噬體與溶酶體結(jié)合。自噬體具有雙層膜結(jié)構(gòu),它包含大量的細(xì)胞代謝物,與溶酶體結(jié)合后將隨著溶酶體被降解代謝。自噬是生物學(xué)過程中的重要調(diào)節(jié)因子,對(duì)饑餓、細(xì)胞死亡、癌癥、神經(jīng)退行性疾病,以及病毒防御都發(fā)揮著重要作用,是機(jī)體自身的一種自我保護(hù)措施。近年來大量的研究表明,自噬與免疫的關(guān)系也極為密切。自噬機(jī)制對(duì)抵御病原微生物至關(guān)重要。羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)屬于甲殼綱,長臂蝦科,沼蝦屬。具有生長較快,養(yǎng)殖周期短,食性廣偏愛肉食,肉質(zhì)營養(yǎng)成分好不飽和脂肪酸高,是我國重點(diǎn)養(yǎng)殖品種之一。目前對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞和酵母細(xì)胞的自噬發(fā)生機(jī)制研究較多,但對(duì)水生類動(dòng)物蝦類和貝類細(xì)胞自噬機(jī)制的研究較少。對(duì)于自噬機(jī)制在羅氏沼蝦中的研究尚未見報(bào)道。為此,本研究利用RACE技術(shù)進(jìn)行基因克隆,首次克隆得到羅氏沼蝦的Lc3a與Gabarap基因的cDNA全長,用q RT-PCR檢測(cè)了Lc3a與Gabarap基因在羅氏沼蝦主要組織里的表達(dá)模式;并研究了正常和副溶血...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
    1.1 羅氏沼蝦的發(fā)展現(xiàn)狀及常見的病害問題
        1.1.1 羅氏沼蝦
        1.1.2 羅氏沼蝦的養(yǎng)殖現(xiàn)狀與病害管理
    1.2 自噬的概念與發(fā)展
        1.2.1 自噬類型
        1.2.2 自噬過程及分子機(jī)制
    1.3 Lc3a和 Gabarap在自噬過程的表達(dá)
        1.3.1 Lc3a和 Gabarap在疾病中的作用
    1.4 自噬在水產(chǎn)動(dòng)物中的研究進(jìn)展
    1.5 研究的目的與意義
第二章 羅氏沼蝦Lc3a基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要儀器和設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 組織取樣
        2.2.2 提取總RNA
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        2.2.4 PCR引物設(shè)計(jì)
        2.2.5 PCR擴(kuò)增
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的分離、回收和純化
        2.2.7 目的片段與表達(dá)載體的連接
        2.2.8 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 目的質(zhì)粒的篩選和鑒定
        2.2.10 Lc3a基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.11 Lc3a基因組織表達(dá)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 部分PCR產(chǎn)物電泳圖
        2.3.2 羅氏沼蝦Lc3a基因cDNA序列分析
        2.3.3 羅氏沼蝦Lc3a基因同源性及系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        2.3.4 羅氏沼蝦Lc3a基因組織表達(dá)模式分析
    2.4 討論
        2.4.1 羅氏沼蝦Lc3a基因全長克隆
        2.4.2 羅氏沼蝦Lc3a基因組織表達(dá)模式分析
第三章 羅氏沼蝦Gabarap基因克隆
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        3.1.2 主要儀器和設(shè)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 RNA提取
        3.1.5 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        3.1.6 mRNA全長克隆
        3.1.7 DNA提取
        3.1.8 DNA全長克隆
        3.1.9 PCR產(chǎn)物回收
        3.1.10 連接及轉(zhuǎn)化
        3.1.11 目的質(zhì)粒的篩選和鑒定
        3.1.12 Gabarap基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.13 Gabarap基因組織表達(dá)分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 部分PCR產(chǎn)物電泳圖
        3.2.2 羅氏沼蝦Gabarap基因cDNA序列分析與DNA全長
        3.2.3 羅氏沼蝦Gabarap基因同源性及系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        3.2.4 羅氏沼蝦Gabarap基因組織表達(dá)模式分析
    3.3 討論
        3.3.1 羅氏沼蝦Gabarap基因全長克隆
        3.3.2 羅氏沼蝦Gabarap基因組織表達(dá)模式分析
第四章 副溶血弧菌脅迫下Lc3a和 Gabarap基因的表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)用水
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 副溶血弧菌感染實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 Lc3a和 Gabarap基因的表達(dá)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 副溶血弧菌感染對(duì)羅氏沼蝦肝胰腺組織Lc3a基因表達(dá)的影響
        4.3.2 副溶血弧菌感染對(duì)羅氏沼蝦肝胰腺組織Gabarap基因表達(dá)的影響
        4.3.3 副溶血弧菌感染對(duì)羅氏沼蝦肝胰腺組織Relish基因表達(dá)的影響
        4.3.4 副溶血弧菌對(duì)羅氏沼蝦的累積死亡率的影響
    4.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3788264