為揭示TNF-α受體基因TNF-R1和TNF-R2在尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)免疫過程的作用,本研究利用RACE技術(shù)獲得了TNF-R1和TNF-R2的cDNA。結(jié)果表明,TNF-R1 cDNA全長2 275 bp,ORF區(qū)1 335bp,編碼444個氨基酸;TNF-R2 cDNA全長1 719 bp,ORF區(qū)1 476 bp,編碼491個氨基酸。TNF-R1含3個富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域(cysteine-rich domain, CRD)和一個死亡結(jié)構(gòu)域(death domain,DD),而TNF-R2有4個CRD,缺少DD。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明:其TNF-R1和TNF-R2分別與其他脊椎動物TNF-R1和TNF-R2基因同源性很高,在進(jìn)化樹中TNF-R1、TNF-R2各自聚類且兩者之間分支明顯。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果表明:TNF-R1和TNF-R2在該魚體的不同組織中均有表達(dá),其中在鰓、頭腎和脾臟中表達(dá)水平最高,而在肌肉、垂體中表達(dá)量低。用脂多糖(LPS)和多聚肌苷酸-胞苷酸(PolyⅠ:C)分別刺激離體孵育的該魚頭腎和脾臟白細(xì)胞可不同程度上調(diào)TNF-α、TNF...

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)用魚和樣品采集
    1.2 RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
    1.3 TNF-R1與TNF-R2 c DNA的克隆和測序
    1.4 生物信息學(xué)分析
    1.5 Realtime PCR分析
    1.6 體外實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞孵育和免疫刺激
    1.7 在體實(shí)驗(yàn)：感染攻毒實(shí)驗(yàn)
    1.8 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 尼羅羅非魚TNF-R1和TNF-R2序列分析
    2.2 尼羅羅非魚TNF-R1和TNF-R2的組織表達(dá)分析
    2.3 尼羅羅非魚TNF-α、TNF-R1和TNF-R2的體外刺激表達(dá)分析
    2.4 尼羅羅非魚TNF-R1和TNF-R2的體內(nèi)刺激表達(dá)分析
3 討論



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