為了建立轉(zhuǎn)基因水稻中CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的免疫學(xué)檢測方法,并了解其在水稻生長過程中的表達(dá)特征,本研究在大腸桿菌中表達(dá)了CP4-EPSPS蛋白質(zhì),純化后以其為免疫原免疫小鼠,經(jīng)篩選獲得了可識別CP4-EPSPS的單克隆抗體。建立了用免疫印記技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因水稻中CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的方法,該方法可以從單粒稻米的0.63%材料中檢測到CP4-EPSPS信號。對水稻不同發(fā)育時期代表性組織的檢測結(jié)果表明,CP4-EPSPS蛋白質(zhì)呈組成型表達(dá),在花藥、穗軸、穎殼及不同時期的葉片中的表達(dá)量較高,但在分蘗期基部莖節(jié)、葉鞘及成熟期種子胚中的表達(dá)量稍低。本研究建立的免疫學(xué)方法在轉(zhuǎn)基因水稻檢測中具有潛在的應(yīng)用價值。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 Cp4-epsps基因的克隆
    1.3 CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的表達(dá)與純化
    1.4 抗CP4-EPSPS抗體的制備及特異性檢測
    1.5 水稻總蛋白質(zhì)提取
    1.6 免疫印記分析(Western blot,WB)
2 結(jié)果與分析
    2.1 Cp4-epsps基因的克隆
    2.2 CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的表達(dá)及抗體制備
    2.3 轉(zhuǎn)基因水稻稻米中CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的檢測
    2.4 轉(zhuǎn)基因水稻幼苗期CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的表達(dá)特征
    2.5 轉(zhuǎn)基因水稻成株期CP4-EPSPS蛋白質(zhì)的表達(dá)特征
3 討論
4 結(jié)論



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