本文以半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)為研究對象,利用同源克隆和RACE方法獲得了半滑舌鰨兩種leptin基因(lepa和lepb)及一種受體基因lepr的全長cDNA序列。采用實時熒光定量PCR技術檢測了leptin及其受體基因的組織分布特征、早期生長發(fā)育過程和生殖周期的時空表達特性。最后,利用原核表達技術實現(xiàn)了半滑舌鰨lepa和lepb體外重組表達和生物活性檢測,獲得了具有生物活性的重組蛋白。本研究結果為全面認識半滑舌鰨生長發(fā)育與生殖機能的調(diào)控機制提供了新的基礎資料積累。1.半滑舌鰨leptin及其受體基因的克隆和組織表達分析獲得了半滑舌鰨兩種leptin基因(lepa和lepb)及一種受體基因lepr的全長cDNA序列。lepa和lepb的cDNA全長為1265 bp和1157 bp,分別編碼160個氨基酸和158個氨基酸,其空間結構具有較強的保守性。lepr的cDNA全長為4576 bp,編碼1133個氨基酸。系統(tǒng)發(fā)育分析表明半滑舌鰨LepA、LepB和LepR與棘鰭總目魚聚為一支。lepa mRNA在卵巢和腦中高表達。lepb mRNA在各組織中均檢測...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1 leptin及其受體的基因結構
        1.1 leptin的基因結構
        1.2 leptin受體的基因結構
    2 leptin及其受體的組織表達差異
        2.1 leptin的組織分布
        2.2 leptin受體的組織分布
    3 leptin的生理學功能
        3.1 leptin在攝食調(diào)節(jié)中的作用
        3.2 leptin在調(diào)控糖脂代謝中的作用
        3.3 leptin在生殖調(diào)控中的作用
        3.4 leptin的其他作用
    4 leptin的信號轉(zhuǎn)導途徑
第二章 半滑舌鰨leptin及其受體的克隆和組織表達分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 總RNA提取
        1.3 cDNA反轉(zhuǎn)錄
        1.4 中間片段的克隆
        1.5 5'端和3'端cDNA片段的克隆
        1.6 序列分析
        1.7 熒光定量PCR檢測
    2 結果
        2.1 lepa、lepb和 lepr的 cDNA克隆表達和系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2 lepa、lepb和 lepr基因的組織分布表達
    3 討論
第三章 瘦素及其受體對半滑舌鰨早期生長發(fā)育的調(diào)控作用
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR檢測
        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結果
        2.1 胚胎發(fā)育過程中l(wèi)epa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表達模式
        2.2 仔魚和稚魚生長過程中l(wèi)epa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表達模式
        2.3 相關性分析
    3 討論
第四章 瘦素及其受體對半滑舌鰨卵巢發(fā)育的調(diào)控作用
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR檢測
        1.3 血清激素的測定
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結果
        2.1 卵巢發(fā)育分期
        2.2 腦、垂體和卵巢中l(wèi)epa、lepb和 leprmRNA在不同發(fā)育時期的表達特性
        2.3 血清中激素濃度變化
        2.4 相關性分析
    3 討論
第五章 半滑舌鰨兩種leptin基因的體外重組表達和生物活性分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 總RNA提取與cDNA第一鏈的合成
        1.3 重組質(zhì)粒的構建
        1.4 重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的誘導表達與檢測
        1.5 重組蛋白western-blotting驗證和質(zhì)譜分析
        1.6 重組蛋白的分離和純化
        1.7 重組蛋白生物活性檢測
        1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結果
        2.1 半滑舌鰨lepa/pQE30和lepb/pQE30 重組質(zhì)粒的構建
        2.2 重組蛋白的誘導表達
        2.3 重組蛋白的western-blotting驗證
        2.4 重組蛋白的分離純化
        2.5 重組蛋白的生物活性的檢測
    3 討論
結論
研究展望
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3782693