本文以半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)為研究對(duì)象,利用同源克隆和RACE方法獲得了半滑舌鰨兩種leptin基因(lepa和lepb)及一種受體基因lepr的全長(zhǎng)cDNA序列。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了leptin及其受體基因的組織分布特征、早期生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程和生殖周期的時(shí)空表達(dá)特性。最后,利用原核表達(dá)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了半滑舌鰨lepa和lepb體外重組表達(dá)和生物活性檢測(cè),獲得了具有生物活性的重組蛋白。本研究結(jié)果為全面認(rèn)識(shí)半滑舌鰨生長(zhǎng)發(fā)育與生殖機(jī)能的調(diào)控機(jī)制提供了新的基礎(chǔ)資料積累。1.半滑舌鰨leptin及其受體基因的克隆和組織表達(dá)分析獲得了半滑舌鰨兩種leptin基因(lepa和lepb)及一種受體基因lepr的全長(zhǎng)cDNA序列。lepa和lepb的cDNA全長(zhǎng)為1265 bp和1157 bp,分別編碼160個(gè)氨基酸和158個(gè)氨基酸,其空間結(jié)構(gòu)具有較強(qiáng)的保守性。lepr的cDNA全長(zhǎng)為4576 bp,編碼1133個(gè)氨基酸。系統(tǒng)發(fā)育分析表明半滑舌鰨LepA、LepB和LepR與棘鰭總目魚(yú)聚為一支。lepa mRNA在卵巢和腦中高表達(dá)。lepb mRNA在各組織中均檢測(cè)...

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 leptin及其受體的基因結(jié)構(gòu)
        1.1 leptin的基因結(jié)構(gòu)
        1.2 leptin受體的基因結(jié)構(gòu)
    2 leptin及其受體的組織表達(dá)差異
        2.1 leptin的組織分布
        2.2 leptin受體的組織分布
    3 leptin的生理學(xué)功能
        3.1 leptin在攝食調(diào)節(jié)中的作用
        3.2 leptin在調(diào)控糖脂代謝中的作用
        3.3 leptin在生殖調(diào)控中的作用
        3.4 leptin的其他作用
    4 leptin的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
第二章 半滑舌鰨leptin及其受體的克隆和組織表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 總RNA提取
        1.3 cDNA反轉(zhuǎn)錄
        1.4 中間片段的克隆
        1.5 5'端和3'端cDNA片段的克隆
        1.6 序列分析
        1.7 熒光定量PCR檢測(cè)
    2 結(jié)果
        2.1 lepa、lepb和 lepr的 cDNA克隆表達(dá)和系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2 lepa、lepb和 lepr基因的組織分布表達(dá)
    3 討論
第三章 瘦素及其受體對(duì)半滑舌鰨早期生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控作用
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR檢測(cè)
        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 胚胎發(fā)育過(guò)程中l(wèi)epa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表達(dá)模式
        2.2 仔魚(yú)和稚魚(yú)生長(zhǎng)過(guò)程中l(wèi)epa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表達(dá)模式
        2.3 相關(guān)性分析
    3 討論
第四章 瘦素及其受體對(duì)半滑舌鰨卵巢發(fā)育的調(diào)控作用
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR檢測(cè)
        1.3 血清激素的測(cè)定
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 卵巢發(fā)育分期
        2.2 腦、垂體和卵巢中l(wèi)epa、lepb和 leprmRNA在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)特性
        2.3 血清中激素濃度變化
        2.4 相關(guān)性分析
    3 討論
第五章 半滑舌鰨兩種leptin基因的體外重組表達(dá)和生物活性分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 總RNA提取與cDNA第一鏈的合成
        1.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)與檢測(cè)
        1.5 重組蛋白western-blotting驗(yàn)證和質(zhì)譜分析
        1.6 重組蛋白的分離和純化
        1.7 重組蛋白生物活性檢測(cè)
        1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 半滑舌鰨lepa/pQE30和lepb/pQE30 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3 重組蛋白的western-blotting驗(yàn)證
        2.4 重組蛋白的分離純化
        2.5 重組蛋白的生物活性的檢測(cè)
    3 討論
結(jié)論
研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3782693