RING基因家族是一個(gè)超級(jí)大家族,其成員參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)階段。其中RING-H2亞家族成員最豐富,在脅迫應(yīng)答、激素調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及光形態(tài)建成等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。楊樹有多個(gè)RING-H2成員,在木質(zhì)部組織內(nèi)較特異或高豐度表達(dá),但這些基因遺傳功能尚未被鑒定,本研究從中識(shí)別了PtrRHH94基因進(jìn)行研究和分析,主要研究結(jié)果如下:毛果楊RING-H2亞家族有288個(gè)成員,其中30個(gè)在木質(zhì)部特異或高豐度表達(dá)的基因,啟動(dòng)子區(qū)域包含多個(gè)與次生生長(zhǎng)相關(guān)的順式作用元件,PtrRHH94基因只有2個(gè)M46RE順式作用元件。RT-PCR結(jié)果表明,PtrRHH94基因在木質(zhì)部特異表達(dá),其它部位幾乎不表達(dá)或表達(dá)量極低。構(gòu)建啟動(dòng)子融合GUS報(bào)告基因的pGWB3-PtrRHH94pro載體,轉(zhuǎn)化毛果楊后組織化學(xué)染色分析顯示,其主要在木質(zhì)化的莖和根的次生維管組織表達(dá),其強(qiáng)度隨莖木質(zhì)化程度的增加而增加�；贑as9/gRNA基因編輯技術(shù),我們?cè)赑trRHH94基因上設(shè)計(jì)3個(gè)特異的靶位點(diǎn),創(chuàng)制出多株毛果楊PtrRHH94敲除突變體,且均為有效編輯,不同株突變體表型相同。與野生型相比,該基因敲除后毛果楊...

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摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 RING家族基因
    1.2 RING-H2基因家族
        1.2.1 RING-H2鋅指結(jié)構(gòu)
        1.2.2 RING-H2鋅指蛋白結(jié)構(gòu)多樣性
        1.2.3 RING-H2功能進(jìn)展
    1.3 RING-HC基因結(jié)構(gòu)及功能
    1.4 修飾型RING結(jié)構(gòu)域及其功能
    1.5 植物莖的發(fā)育
    1.6 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 常用試劑和培養(yǎng)基
    2.3 儀器設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 RING基因數(shù)據(jù)收集及分析
        2.4.2 植物總DNA的提取
        2.4.3 植物總RNA的提取
        2.4.4 cDNA的合成
        2.4.5 引物設(shè)計(jì)
        2.4.6 pHSE401-PtrRHH94基因編輯載體的構(gòu)建
        2.4.7 PCR擴(kuò)增
        2.4.8 目的DNA片段膠回收
        2.4.9 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化
        2.4.10 質(zhì)粒的提取
        2.4.11 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
        2.4.12 毛果楊的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.4.13 植物組織石蠟包埋與切片
        2.4.14 細(xì)胞壁組織化學(xué)染色
        2.4.15 纖維素含量測(cè)定
        2.4.16 木質(zhì)素含量測(cè)定
        2.4.17 纖維長(zhǎng)度和寬度測(cè)量
        2.4.18 光學(xué)顯微鏡觀察
        2.4.19 掃描電鏡
        2.4.20 細(xì)胞壁厚度測(cè)量
3 結(jié)果與分析
    3.1 毛果楊RING-H2亞基因家族成員識(shí)別
    3.2 木質(zhì)部高豐度表達(dá)的RING-H2基因啟動(dòng)子區(qū)域與次生生長(zhǎng)相關(guān)順式作用元件分析
    3.3 PtrRHH94在毛果楊組織中轉(zhuǎn)錄表達(dá)特征
    3.4 毛果楊PtrRHH94基因啟動(dòng)子組織表達(dá)活性鑒定
    3.5 pHSE401-PtrRHH94基因編輯載體構(gòu)建
    3.6 Cas9/gRNA-PtrRHH94轉(zhuǎn)化毛果楊及分子鑒定和靶基因編輯分析
    3.7 PtrRHH94基因敲除突變體生長(zhǎng)表型分析
    3.8 PtrRHH94基因敲除突變體莖組織結(jié)構(gòu)分析
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3767217