金烏賊(Sepia esculenta)是頭足類鞘亞綱(Coleoidea)代表種,一年生且終生僅繁殖一次,生殖后快速死亡,屬于一次生殖類型。這種在短時間內(nèi)發(fā)生的生殖和死亡現(xiàn)象可以作為研究生殖、衰老和死亡之間錯綜復雜關(guān)系的切入點。衰老的端粒學說(Telomere theory)認為端粒在細胞老化過程中起重要作用,每次細胞分裂都會因DNA聚合酶功能障礙而不能完全復制它們的染色體,端粒DNA序列長度逐漸縮短,最終造成細胞衰老死亡。端粒酶(Telomerase)能延長端粒重復序列,維持染色體穩(wěn)定,確保細胞復制能力(Wright et al,1995)。TERT(telomerase reverse transcriptase)基因是端粒酶起作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和主要調(diào)控亞單位,通過逆轉(zhuǎn)錄端粒酶RNA模板序列,合成端粒DNA重復序列并添加到染色體末端,從而維持并延長端粒長度。為了探究金烏賊生殖前后至自然死亡過程中TERT基因表達變化規(guī)律,本研究從課題組前期獲得的金烏賊卵巢轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選出TERT基因,并選取了金烏賊的生長期(Growth Stage,GS)、生殖期產(chǎn)卵期(Spawning Stag...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 衰老的端粒學說
    1.2 端粒與端粒酶研究進展
        1.2.1 端粒與端粒酶的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 端粒結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.3 端粒酶結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.4 端粒及端粒酶與衰老關(guān)系
    1.3 端粒檢測方法
        1.3.1 DNA印跡法
        1.3.2 實時熒光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)
        1.3.3 熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)
    1.4 端粒酶檢測方法
        1.4.1 端粒酶活性檢測
        1.4.2 端粒酶相關(guān)基因表達水平檢測
    1.5 qRT-PCR內(nèi)參基因研究進展
        1.5.1 qRT-PCR內(nèi)參基因作用
        1.5.2 影響內(nèi)參選擇的因素
        1.5.3 軟體動物qRT-PCR研究進展
    1.6 金烏賊概述
        1.6.1 金烏賊結(jié)構(gòu)與形態(tài)特征
        1.6.2 金烏賊習性
        1.6.3 金烏賊相關(guān)研究進展
    1.7 主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.7.1 主要研究內(nèi)容
        1.7.2 技術(shù)路線圖
    1.8 本研究目的與意義
第二章 金烏賊qRT-PCR內(nèi)參基因篩選
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 候選內(nèi)參基因的引物設計
        2.2.4 實時熒光定量PCR
        2.2.5 統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 候選內(nèi)參基因qRT-PCR擴增
        2.3.2 內(nèi)參基因在產(chǎn)卵期雌雄金烏賊性腺和肝臟的表達水平差異
        2.3.3 BestKeeper分析候選內(nèi)參基因的表達穩(wěn)定性差異
        2.3.4 geNorm分析候選內(nèi)參基因的表達穩(wěn)定性
        2.3.5 Normfinder分析候選內(nèi)參基因的表達穩(wěn)定性
        2.3.6 geNorm、Normfinder和 Bestkeeper軟件分析結(jié)果匯總
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 金烏賊TERT基因鑒定和組織差異表達分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗方法
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 TERT基因的篩選與鑒定
        3.3.2 不同組織TERT基因表達規(guī)律
        3.3.3 金烏賊TERT基因表達性別差異
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
存在的問題
下一步研究計劃
碩士期間參與課題
研究成果
參考文獻
致謝



本文編號：3761292