金烏賊(Sepia esculenta)是頭足類鞘亞綱(Coleoidea)代表種,一年生且終生僅繁殖一次,生殖后快速死亡,屬于一次生殖類型。這種在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生的生殖和死亡現(xiàn)象可以作為研究生殖、衰老和死亡之間錯(cuò)綜復(fù)雜關(guān)系的切入點(diǎn)。衰老的端粒學(xué)說(Telomere theory)認(rèn)為端粒在細(xì)胞老化過程中起重要作用,每次細(xì)胞分裂都會(huì)因DNA聚合酶功能障礙而不能完全復(fù)制它們的染色體,端粒DNA序列長(zhǎng)度逐漸縮短,最終造成細(xì)胞衰老死亡。端粒酶(Telomerase)能延長(zhǎng)端粒重復(fù)序列,維持染色體穩(wěn)定,確保細(xì)胞復(fù)制能力(Wright et al,1995)。TERT(telomerase reverse transcriptase)基因是端粒酶起作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和主要調(diào)控亞單位,通過逆轉(zhuǎn)錄端粒酶RNA模板序列,合成端粒DNA重復(fù)序列并添加到染色體末端,從而維持并延長(zhǎng)端粒長(zhǎng)度。為了探究金烏賊生殖前后至自然死亡過程中TERT基因表達(dá)變化規(guī)律,本研究從課題組前期獲得的金烏賊卵巢轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選出TERT基因,并選取了金烏賊的生長(zhǎng)期(Growth Stage,GS)、生殖期產(chǎn)卵期(Spawning Stag...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 衰老的端粒學(xué)說
    1.2 端粒與端粒酶研究進(jìn)展
        1.2.1 端粒與端粒酶的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 端粒結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.3 端粒酶結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.4 端粒及端粒酶與衰老關(guān)系
    1.3 端粒檢測(cè)方法
        1.3.1 DNA印跡法
        1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)
        1.3.3 熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)
    1.4 端粒酶檢測(cè)方法
        1.4.1 端粒酶活性檢測(cè)
        1.4.2 端粒酶相關(guān)基因表達(dá)水平檢測(cè)
    1.5 qRT-PCR內(nèi)參基因研究進(jìn)展
        1.5.1 qRT-PCR內(nèi)參基因作用
        1.5.2 影響內(nèi)參選擇的因素
        1.5.3 軟體動(dòng)物qRT-PCR研究進(jìn)展
    1.6 金烏賊概述
        1.6.1 金烏賊結(jié)構(gòu)與形態(tài)特征
        1.6.2 金烏賊習(xí)性
        1.6.3 金烏賊相關(guān)研究進(jìn)展
    1.7 主要研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線
        1.7.1 主要研究?jī)?nèi)容
        1.7.2 技術(shù)路線圖
    1.8 本研究目的與意義
第二章 金烏賊qRT-PCR內(nèi)參基因篩選
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 候選內(nèi)參基因的引物設(shè)計(jì)
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 候選內(nèi)參基因qRT-PCR擴(kuò)增
        2.3.2 內(nèi)參基因在產(chǎn)卵期雌雄金烏賊性腺和肝臟的表達(dá)水平差異
        2.3.3 BestKeeper分析候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性差異
        2.3.4 geNorm分析候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性
        2.3.5 Normfinder分析候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性
        2.3.6 geNorm、Normfinder和 Bestkeeper軟件分析結(jié)果匯總
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 金烏賊TERT基因鑒定和組織差異表達(dá)分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 TERT基因的篩選與鑒定
        3.3.2 不同組織TERT基因表達(dá)規(guī)律
        3.3.3 金烏賊TERT基因表達(dá)性別差異
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
存在的問題
下一步研究計(jì)劃
碩士期間參與課題
研究成果
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3761292