目的:腎細(xì)胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)簡稱腎癌,占全球每年10.2萬人死亡的人類惡性腫瘤的3%。根據(jù)美國癌癥協(xié)會(American Cancer Society)的數(shù)據(jù),到2018年,預(yù)計在65,340例發(fā)病病例和14,970例死亡病例中,RCC將占8%。盡管診斷技術(shù)不斷進步,但約30%的腎癌患者診斷為晚期腎癌,對放療和化療的敏感性較低,治療效果較差,僅有10%到20%的患者對免疫白介素2(Il-2)和干擾素(IFN-type)有效果。因此,尋找準(zhǔn)確有效的抗RCC分子治療靶點,了解其發(fā)生的關(guān)鍵分子機制,是制定治療RCC(腎癌)新策略的關(guān)鍵。泛素化蛋白系統(tǒng)(UPS)通過及時降解多種調(diào)控蛋白,實現(xiàn)真核生物細(xì)胞的基本功能。作為一種主要的蛋白降解通路,UPS參與了一系列生物過程,例如增殖、分化、凋亡及應(yīng)激反應(yīng)。因此,UPS的功能紊亂會破壞蛋白質(zhì)的降解功能,導(dǎo)致包括癌癥在內(nèi)的多種疾病。UPS的靶向性成為抗癌治療的熱點。而蛋白抑制劑Bortezomib在2008年被FDA批準(zhǔn)用于治療骨髓瘤患者表明UPS抗癌治療的有效性。但是Bortezmib對正常細(xì)胞的毒性限制了它的使...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第1章 前言
    1.1 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)概述
    1.2 CRL通過cullin-基礎(chǔ)的RINGE3 連接酶和它們導(dǎo)致的生物過程
        1.2.1 CRL1
        1.2.2 CRL2
        1.2.3 CRL3
        1.2.4 CRL4
        1.2.5 CRL5
        1.2.6 CRL7/CRL9
    1.3 類泛素化
    1.4 RING組成成分SAG或 ROC1 以及NAE為抗癌靶點的可能性
    1.5 腎癌
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要實驗儀器設(shè)備
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 實驗試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞克隆形成實驗
        2.2.3 ATPLite 細(xì)胞增殖實驗（ATPLite proliferation assay）
        2.2.4 HE、免疫組織化學(xué)染色（HE staining，IHC）
        2.2.5 蛋白免疫印跡（western blot）
        2.2.6 流式細(xì)胞檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡
        2.2.7 細(xì)胞凋亡檢測：DNA-fragmentation檢測
        2.2.8 構(gòu)建質(zhì)粒（本實驗的 SAG，ROC1 質(zhì)粒均來自 YI Sun 實驗室，只構(gòu)建了 NAE）
        2.2.9 質(zhì)粒提取
        2.2.10 慢病毒的構(gòu)建
        2.2.11 慢病毒載體的包裝
        2.2.12 慢病毒滴度測定（用 293T 細(xì)胞測定）
        2.2.13 慢病毒感染
        2.2.14 細(xì)胞衰老檢測：SA-β-gal 染色
        2.2.15 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 SAG、ROC1、NAE在人腎癌組織中過表達,與患者生存不良有關(guān)
    3.2 下調(diào)SAG、ROC1或NAE可抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞的生長。
    3.3 沉默SAG、ROC1、NAE誘發(fā)RCC細(xì)胞細(xì)胞凋亡,在 ROC1和SAG沉默的細(xì)胞中尤為明顯
    3.4 沉默SAG、ROC1或NAE可引起RCC細(xì)胞G2 阻滯和細(xì)胞衰老
    3.5 BIM沉默部分緩解了因SAG、ROC1或NAE沉默對細(xì)胞增殖和存活的抑制作用
    3.6 BIM沉默部分挽救因沉默SAG、ROC1或NAE而誘發(fā)的細(xì)胞凋亡和衰老
第4章 討論
    4.1 SAG(凋亡敏感基因，Sensitive to Apoptosis Gene)
    4.2 ROC1 /RBX1
    4.3 NAE
    4.4 BIM
    4.5 主要創(chuàng)新點
    4.6 不足之處
全文總結(jié)
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3744088