香豆酸輔酶A連接酶(4-coumarate:CoA lig-ase,4CL)是植物類黃酮類化合物和木質(zhì)素等生物合成途徑的一種關(guān)鍵酶,參與合成多種次生代謝物,在植物生長發(fā)育中起著重要作用。該試驗采用同源克隆法和RACE技術(shù)從膜莢黃芪RNA中克隆得到4CL基因。利用生物信息學(xué)軟件和熒光定量PCR技術(shù),對該基因的功能和特征進行分析。結(jié)果表明:4CL基因(GenBank登錄號KY086284)的cDNA序列長度為1 937 bp,其ORF編碼546個氨基酸,屬于疏水性蛋白。實時熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn),Am4CL基因在根、莖、葉中的表達趨勢與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量基本一致,推測Am4CL基因在膜莢黃芪異黃酮生物合成中發(fā)揮著重要的作用。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1) 植物材料
        2) 試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 總RNA提取與cDNA的合成
        1.2.3 4CL基因保守區(qū)克隆
        1.2.4 5’RACE 和 3’RACE 擴增
        1.2.5 4CL基因編碼區(qū)的克隆
        1.2.6 4CL基因的生物信息學(xué)分析
        1.2.7 膜莢黃芪4CL基因的熒光定量PCR分析
        1.2.8 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的測定
        1.2.9 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 Am4CL基因全長cDNA克隆
    2.2 膜莢黃芪4CL基因的序列分析
    2.3 4CL的生物信息學(xué)分析
    2.4 膜莢黃芪Am4CL基因表達量分析
3 討論與結(jié)論



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