美國白蛾核型多角體病毒（Hyphantria cunea Nuclear Polyhedrosis Virus,HycuNPV）作為一種強(qiáng)效、無危害、�；詮�(qiáng)和環(huán)境友好型的生防致病因子,在美國白蛾種群的持續(xù)防控中占據(jù)重要地位。本論文通過高效、快速的HycuNPV定量檢測方法和ORF72基因的研究,為該病毒的持續(xù)控制提供了可行的監(jiān)測方法,同時(shí)彌補(bǔ)了其在ORF72基因功能研究上的空白。論文研究結(jié)果如下:1.利用TaqMan探針法成功建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)HycuNPV含量進(jìn)行檢測的方法。首先,將polh基因構(gòu)建到pGEM-T-easy載體上,制備標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒。然后,將標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒10倍梯度稀釋為1.0×10~8、1.0×10~7、1.0×10~6、1.0×10~5、1.0×10~4和1.0×10~3copies/μL 6個(gè)梯度濃度,以此為模版進(jìn)行熒光定量PCR,建立標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后,通過得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出幼蟲在接毒后的不同時(shí)間點(diǎn)其體內(nèi)所含的病毒拷貝數(shù)。驗(yàn)證方法:以取食3.0×10~6PIB/mL濃度病毒的美國白蛾幼蟲基因組DNA為模版,進(jìn)行熒光定量PCR后發(fā)現(xiàn),病毒在幼蟲... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 桿狀病毒概況
        1.1.1 桿狀病毒簡介
        1.1.2 桿狀病毒的分類
        1.1.3 桿狀病毒的應(yīng)用概況
    1.2 美國白蛾
        1.2.1 美國白蛾生物學(xué)特性
        1.2.2 美國白蛾的發(fā)生與危害
        1.2.3 美國白蛾的防治概況
    1.3 美國白蛾核型多角體病毒
        1.3.1 美國白蛾核型多角體病毒簡介及其應(yīng)用
        1.3.2 美國白蛾核型多角體病毒的檢測
        1.3.3 美國白蛾核型多角體病毒基因的研究
    1.4 研究目的與意義、內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.4.1 研究目的與意義
        1.4.2 主要研究內(nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 供試蟲源
        2.1.2 儀器與設(shè)備
        2.1.3 試劑及緩沖液的配置
    2.2 方法
        2.2.1 HycuNPV Taq Man探針法熒光定量PCR檢測方法的建立
        2.2.2 HycuNPV ORF72基因的研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 HycuNPV Taq Man探針法熒光定量PCR檢測方法的建立
        3.1.1 HycuNPV polh基因的擴(kuò)增
        3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的制備
        3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與擴(kuò)增曲線的繪制
        3.1.4 重復(fù)性驗(yàn)證
        3.1.5 不同時(shí)間點(diǎn)幼蟲體內(nèi)病毒含量
    3.2 HycuNPV ORF72基因的研究
        3.2.1 HycuNPV基因組DNA的提取
        3.2.2 HycuNPV ORF72基因的擴(kuò)增
        3.2.3 ORF72基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.4 限制性內(nèi)切酶對(duì)ORF72基因和pGEX-4T-1 載體質(zhì)粒的雙酶切
        3.2.5 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72重組質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.6 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.7 ORF72蛋白可溶性表達(dá)的鑒定及其蛋白的純化
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
        4.2.1 探針法熒光定量PCR檢測方法的建立
        4.2.2 ORF72蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)分析
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]駑巴貝斯蟲TaqMan-MGB熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 張楊,王振寶,劉世芳,瓦熱斯·吐爾松,巴音查汗.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(01)
[2]TaqMan熒光定量PCR快速檢測錦鯉皰疹病毒方法的建立與應(yīng)用[J]. 李濤,萬譯文,劉登望.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(07)
[3]斯氏線蟲對(duì)美國白蛾幼蟲取食差異性的初步研究[J]. 王春蕾.  農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備. 2016(04)
[4]荔波連蕊茶GA2ox1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 肖政,李紀(jì)元,范正琪,李辛雷,殷恒福.  林業(yè)科學(xué)研究. 2016(01)
[5]美國白蛾的防治方法[J]. 李嬌,袁寶峰.  北京農(nóng)業(yè). 2016(03)
[6]美國白蛾的發(fā)生規(guī)律及防治措施[J]. 李修柱.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2015(19)
[7]美國白蛾核型多角體病毒對(duì)家蠶的安全性研究[J]. 劉芳芳,劉笛,孟向東,喬魯芹.  山東林業(yè)科技. 2015(03)
[8]美國白蛾發(fā)生與防治研究綜述[J]. 閆家河,劉芹,王文亮,夏明輝,趙燕,楊啟萌.  山東林業(yè)科技. 2015(02)
[9]核型多角體病毒基因組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 羅輯,周國英,朱積余.  林業(yè)科學(xué)研究. 2014(04)
[10]周氏嚙小蜂規(guī)模繁放及HcNPV與Bt混劑對(duì)美國白蛾的防治效果研究[J]. 徐明,王光標(biāo),王麗,張利華,徐福元.  江蘇林業(yè)科技. 2014(03)

博士論文
[1]家蠶核多角體病毒（BmNPV）orf126基因的功能研究[D]. 郝碧芳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[2]美國白蛾NPV與Bt混合致病機(jī)理及其對(duì)寄主種群持續(xù)控制作用[D]. 段彥麗.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2008
[3]美國白蛾核型多角體病毒及其感病寄主檢測方法的研究[D]. 喬魯芹.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2007

碩士論文
[1]家蠶桿狀病毒ie0基因功能的研究[D]. 張婷.浙江理工大學(xué) 2016
[2]美國白蛾防治主要技術(shù)研究及綜合防治應(yīng)用[D]. 岳耀鵬.南京林業(yè)大學(xué) 2012
[3]美國白蛾綜合防治技術(shù)研究[D]. 高冬梅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3725982