目的:探討抑癌基因PTEN調(diào)控MAPK/JNK信號通路對結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展及相關(guān)分子機制。方法:（1）細(xì)胞培養(yǎng)及分組:收集結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620分成3組,各組細(xì)胞懸液濃度調(diào)至3*10~5 cells/ml;（2）實驗分組及轉(zhuǎn)染:運用RNA干擾技術(shù)在體外沉默PTEN基因并轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞后設(shè)立3組對照即:（1）空白對照組（不作任何處理）、（2）干擾空載體組（轉(zhuǎn)染siRNA-NC）、（3）干擾表達(dá)組（轉(zhuǎn)染PETN siRNA）;（3）將3組轉(zhuǎn)染后的結(jié)直腸癌細(xì)胞于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h;（4）RT-qPCR檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞系樣本中PTEN基因的含量;（5）采用噻唑藍(lán)（MTT）法檢測各組細(xì)胞的增殖情況;（6）流式細(xì)胞術(shù)檢測PTEN對結(jié)直腸癌細(xì)胞周期的影響;（7）Western blot檢測各組結(jié)直腸癌細(xì)胞中JNK、p-JNK、c-Fos和AP-1蛋白的表達(dá)含量。結(jié)果:（1）RT-qPCR檢測結(jié)果顯示:與干擾空載體組和空白對照組相比,干擾表達(dá)組PTEN的相對含量明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;（2）MTT分析結(jié)果顯示:與干擾空載體組和空白對照組相比,干擾表達(dá)組的細(xì)胞增殖顯著增加... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.前言
2.材料
    2.1 材料
    2.2 主要試劑
    2.3 主要實驗儀器
3.方法
    3.1 SW620 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
    3.2 RT-QPCR檢測SW620 細(xì)胞中PTEN的含量
        3.2.1 提取細(xì)胞總RNA
        3.2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 RT-qPCR
    3.3 MTT檢測各組細(xì)胞的增殖
    3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞的周期
    3.5 WESTERN BLOT檢測各組細(xì)胞中JNK、P-JNK、C-FOS、AP-1 蛋白的表達(dá)
        3.5.1 樣品制備
        3.5.2 蛋白濃度檢測
        3.5.3 western blot
    3.6統(tǒng)計學(xué)處理
4.結(jié)果
    4.1 PETN SIRNA下調(diào)SW620 細(xì)胞中PTEN的表達(dá)
        4.1.1 擴增曲線
        4.1.2 熔解曲線
    4.2 PTEN基因沉默促進(jìn)SW620 細(xì)胞的增殖
    4.3 PTEN基因沉默SW620 細(xì)胞G_2+S期比例增加
        4.3.1 周期圖片
    4.4 PTEN基因沉默上調(diào)MAPK/JNK信號通路中蛋白表達(dá)
        4.4.1 灰度分析
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一
在讀期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文及參與的課題
致謝



本文編號：3725836