斑點叉尾鮰（Ictalurus punctatus）是北美最豐富的鯰魚之一,而Omega-3脂肪酸又對健康有著不容小覷的積極影響。本研究的目的是確定β-肌動蛋白啟動子驅(qū)動的馬蘇鮭魚△-5去飽和酶轉(zhuǎn)基因?qū)1轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰Omega-3脂肪酸產(chǎn)生的促進作用,F1斑點叉尾鮰是由已確認(rèn)的轉(zhuǎn)基因親本繁殖的。從這些后代中獲取肌肉樣本,并進行脂質(zhì)提取。通過氣相色譜-質(zhì)譜法定量測定了Omega-3脂肪酸的含量,并結(jié)合肌肉成分分析（水分,灰分,脂肪率,含水率,蛋白質(zhì)含量）,確定其抗病的多效性。此外,還采用了一種新的方法,利用多種轉(zhuǎn)基因來改變一條脂肪酸代謝途徑中的多個步驟,這在水產(chǎn)養(yǎng)殖物種中還沒有報道過。本研究利用了顯微注射和CRISPR/Cas9介導(dǎo)的技術(shù)成功地將apo14-masousalmon-elovl2基因插入到了斑點叉尾鮰的1號染色體上,另外還監(jiān)測到一條斑點叉尾鮰的2號和7號染色體上均有目的基因的插入。經(jīng)脂肪酸檢測與分析,由β-肌動蛋白啟動子驅(qū)動的馬蘇鮭魚△-5去飽和酶轉(zhuǎn)基因?qū)mega-3脂肪酸的產(chǎn)生有積極的影響。F1雌性轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的Omega-3脂肪酸產(chǎn)生率比對照斑點叉尾鮰的高2... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
第二章 實驗材料與方法
    2.1 轉(zhuǎn)基因的構(gòu)建
        2.1.1 供體β-action-elovl2 去飽和酶轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒結(jié)構(gòu)
        2.1.2 供體β-actin-△4 去飽和酶轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒
        2.1.3 β-actin-△5_6 去飽和酶轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒
        2.1.4 g RNA和 Cas9 蛋白制備
    2.2 親本斑點叉尾鮰的處理
    2.3 顯微注射
    2.4 人工授精產(chǎn)生子一代
    2.5 胚胎的孵化及幼魚的養(yǎng)殖
    2.6 DNA的提取和PCR檢驗
    2.7 脂質(zhì)的提取及脂肪酸的分析
    2.8 體成分分析(組分分析)
        2.8.1 水分
        2.8.2 灰分
        2.8.3 蛋白質(zhì)
    2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 靶向基因的插入
    3.2 轉(zhuǎn)基因F1 斑點叉尾鮰的脂肪酸組成
    3.3 轉(zhuǎn)基因F1 斑點叉尾鮰的Omega-3 脂肪酸的含量
    3.4 轉(zhuǎn)基因F1 斑點叉尾鮰的Omage-6 脂肪酸生產(chǎn)
    3.5 樣品上帶有魚皮對Omega-3/Omega-6 脂肪酸比例的影響
    3.6 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的脂肪百分比(濕重)
    3.7 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰蛋白質(zhì)的百分比(濕重)
    3.8 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的灰份百分比(干重)
    3.9 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的含水率(濕重)
    3.10 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的體重
    3.11 F1 轉(zhuǎn)基因斑點叉尾鮰的低溶解氧耐受性和抗病性
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
附錄
    R code
    縮寫表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]The big bang of genome editing technology: development and application of the CRISPR/Cas9 system in disease animal models[J]. Ming SHAO,Tian-Rui XU,Ce-Shi CHEN.  動物學(xué)研究. 2016(04)
[2]Overexpression of the phytochrome B gene from Arabidopsis thaliana increases plant growth and yield of cotton （Gossypium hirsutum）[J]. Abdul Qayyum RAO,Muhammad IRFAN,Zafar SALEEM,Idrees Ahmad NASIR,Sheikh RIAZUDDIN,Tayyab HUSNAIN.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2011(04)



本文編號：3723147