地下鼠由于常年地下生活,進化出了一系列區(qū)別于地面鼠的適應性特征,典型特征是繁殖力下降。動物繁殖對維護種群穩(wěn)定和物種多樣性有重要意義。銀星竹鼠（Rhizomys pruinosus）作為一種地下鼠,繁殖力較低,平均胎仔數(shù)僅2-4只,是研究地下鼠繁殖調(diào)控的理想物種。對卵巢發(fā)育規(guī)律的研究可為探究銀星竹鼠繁殖調(diào)控提供理論基礎。通過初步探究幾個關鍵時期銀星竹鼠卵巢的發(fā)育,識別與卵巢發(fā)育相關基因和轉錄組遺傳信息,為銀星竹鼠及地下鼠的繁殖研究提供基礎資料,同時也為探究地下鼠卵巢發(fā)育與繁殖力下降的關系奠定理論基礎。本研究采用解剖學方法對不同年齡組（兩周齡組、一月齡組、三月齡組、性成熟組和懷孕組）銀星竹鼠卵巢發(fā)育作了研究,同時做轉錄組測序。在測序結果中篩選差異表達基因（differentially expressed gene,DEG）并對其進行Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）數(shù)據(jù)庫富集,得到顯著性最大的兩條通路:卵巢類固醇合成通路和腎素血管緊張素系統(tǒng)通路。隨后對這兩條通路上的差異表達基因進行實時定量PCR（q-PCR）驗證。旨在初步揭示銀星竹鼠... 

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 地下鼠
    1.2 銀星竹鼠生物學特征
    1.3 哺乳動物卵巢結構與功能
        1.3.1 哺乳動物卵巢的結構
        1.3.2 卵巢的排卵功能
        1.3.3 卵泡的分類
        1.3.4 卵巢的內(nèi)分泌功能
    1.4 卵巢發(fā)育兩種調(diào)控途徑
        1.4.1 卵巢類固醇合成通路
        1.4.2 腎素血管緊張素系統(tǒng)
    1.5 測序技術的發(fā)展歷史
        1.5.1 轉錄組概述
        1.5.2 轉錄組測序的重要步驟及流程
    1.6 研究目的與意義
第2章 銀星竹鼠卵巢發(fā)育
    2.1 研究材料
        2.1.1 研究動物
        2.1.2 研究設備及耗材
        2.1.3 實驗材料及試劑
    2.2 研究方法
        2.2.1 動物組織的提取
        2.2.2 石蠟切片的制作
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 卵泡大小及數(shù)量的測量
    2.3 結果與分析
        2.3.1 不同時期卵巢組織組織學特征
        2.3.2 卵泡計數(shù)
        2.3.3 各級卵泡大小測量
    2.4 討論
第3章 銀星竹鼠卵巢轉錄測序
    3.1 研究材料
        3.1.1 研究動物
        3.1.2 研究設備及耗材
        3.1.3 實驗試劑
    3.2 研究方法
        3.2.1 總RNA提取
        3.2.2 總RNA質(zhì)量檢測
        3.2.3 cDNA文庫構建
        3.2.4 轉錄組質(zhì)控與測序
        3.2.5 Unigene功能注釋及表達量分析
        3.2.6 基因結構分析
        3.2.7 差異表達基因篩選
        3.2.8 差異表達基因功能注釋和富集分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 總RNA提取結果
        3.3.2 轉錄組測序與組裝結果
        3.3.3 Unigene功能注釋
        3.3.4 基因結構分析
        3.3.5 基因表達量分析
        3.3.6 差異表達基因識別
        3.3.7 差異表達基因功能注釋分析
        3.3.8 差異表達基因GO功能富集分析
        3.3.9 差異表達基因KEGG通路注釋
    3.4 討論
第4章 卵巢類固醇合成相關基因表達的q-PCR驗證
    4.1 研究材料
        4.1.1 研究動物
        4.1.2 研究設備及耗材
        4.1.3 實驗試劑
    4.2 研究方法
        4.2.1 cDNA合成
        4.2.2 引物設計
        4.2.3 模板及引物專一性檢測
        4.2.4 實時定量PCR驗證
        4.2.5 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結果及分析
        4.3.1 模板及引物專一性檢測
        4.3.2 類固醇合成相關基因?qū)崟r定量結果
        4.3.3 Cyplla mRNA的表達
        4.3.4 Cyp17 mRNA的表達
        4.3.5 17β-hsd mRNA的表達
        4.3.6 3β3-hsd mRNA的表達
    4.4 討論
第5章 腎素血管緊張素系統(tǒng)相關基因表達的q-PCR驗證
    5.1 材料與方法
    5.2 結果及分析
        5.2.1 模板及引物專一性檢測
        5.2.2 腎素血管緊張素系統(tǒng)相關基因?qū)崟r定量結果
        5.2.3 Ace mRNA的表達
        5.2.4 Cpa3 mRNA的表達
        5.2.5 Cmal mRNA的表達
        5.2.6 Agt mRNA的表達
        5.2.7 AgtIIr2 mRNA的表達
    5.3 討論
第6章 總結及展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學位期間研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]‘無子甌柑’小孢子母細胞減數(shù)分裂異常的分子機理研究[D]. 朱咪咪.浙江農(nóng)林大學 2016
[2]銀星竹鼠的生物學特性研究[D]. 卓智龍.廣西師范大學 2012



本文編號：3718399